----------------------- 页面 1----------------------- 高效液相色谱食品解决方案 方案指南 年 月 2006 11 概述 安捷伦科技公司为食品市场开发了许多重要的高效液相色谱（ ） HPLC 应用方法。本指南概述了食品样品的HPLC分析、推荐了开发应 用方法的初始条件，并提供了涉及各种应用的安捷伦文献信息。 本篇的第一章是应用概述，节选自安捷伦印发的 个主要食品类 13 别的HPLC应用报告。包括详细的色谱条件、标样和实际样品的 色谱图，以及方法的有关信息。如需阅读本指南引用的参考文献， 可以从应用参考索引中查找出版号；通过安捷伦网站输入该发行 号，即可阅读全文。 本指南在系统配置一章中，说明了HPLC 溶剂输送系统和检测器 的类型。食品分析快速参考指南回顾了前面各章节中记述的信息， 在这一章中将那些信息按食品类别进行了归纳。液相色谱基本原 理对分离模式、柱尺寸和填料、样品制备技术、固相萃取和方法 转移等进行了概要介绍。 请注意文中提到的仪器仅仅是推荐使用的仪器。 ----------------------- 页面 2----------------------- 目录 应用概述 3 系统配置 碳水化合物、糖类、糖醇 64 染料、着色剂、色素 64 脂肪和油脂 64 香料、甜味剂、有机酸 64 药草补剂、天然产物、植物激素 64 防腐剂 64 蛋白质、多肽、氨基酸 65 控制使用的 危险的药物 / 65 控制使用的 危险的其它物质 / 65 控制使用的 危险的天然毒素 / 65 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 / 66 脂溶性维生素 66 水溶性维生素 66 食品分析快速参考指南 碳水化合物、糖类、糖醇 67 染料、着色剂、色素 67 脂肪和油脂 67 香料、甜味剂、有机酸 67 药草补剂、天然产物、植物激素 67 防腐剂 68 蛋白质、多肽、氨基酸 68 控制使用的 危险的药物 / 68 控制使用的 危险的其它物质 / 68 控制使用的 危险的天然毒素 / 68 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 / 69 脂溶性维生素 69 水溶性维生素 69 液相色谱的基本原理 液相色谱的基本原理 70 高分离度快速系统和方法的概念 73 方法转移 74 样品制备技术 76 应用参考索引 碳水化合物、糖类、糖醇 78 染料、着色剂、色素 78 脂肪和油脂 79 香料、甜味剂、有机酸 79 药草补剂、天然产物、植物激素 80 防腐剂 82 蛋白质、多肽、氨基酸 82 控制使用的 危险的药物 / 83 控制使用的 危险的其它物质 / 85 控制使用的 危险的天然毒素 / 85 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 / 86 脂溶性维生素 88 水溶性维生素 89 混合应用 90 包装材料 90 2 ----------------------- 页面 3----------------------- 应用概述 测器的灵敏度高，但HPLC不失为一种灵敏的方法， 主要原因是HPLC 每次进样量可高达1-2mL。这一 HPLC在食品添加剂和污染物分析方面的应用越来越多 点，再加上许多检测器的非破坏性特点，可以让我 （见表）。该方法能够将复杂的混合物分离为单一的化 们收集分离的组分进行进一步分析，这对于蛋白质 1 合物，并通过适当的检测器和数据处理系统进行定性 和合成成分的分析是非常重要的。现代样品制备技 术，比如固相萃取（ ）和超临界流体萃取（ ） 和定量分析。分离和检测在室温或稍高于室温的条件 SPE SFE 下进行，所以该方法也适合于分析热稳定性差的化合 也使得HPLC可以进行ppt （一万亿分之一）级化合 物。尽管 的检测器一般没有气相色谱（ ）检 物的高灵敏度分析。 HPLC GC 表1 常用HPLC分析的食品化合物 应用 化合物组 主要分析物 基质 页码 碳水化合物、糖类、糖醇 碳水化合物 5 糖醇 饮料 6 右旋糖酐 7 淀粉 8 碳水化合物 柠檬水 9 染料、着色剂、色素 苏丹染料 食品 10 FDC食品染料、防腐剂 11 花青素 圆白菜 12 脂肪和油脂 磷脂 大豆 14 甘油酸三酯 15 甘油酸三酯 食用油 16 甘油酸三酯及其过氧化物 食用油 17 香料、甜味剂、有机酸 香料、甜味剂、防腐剂 软饮料 18 有机酸 食品 19 调味剂 嗽口水 20 半挥发性香料 21 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯、表面活性剂 可乐类饮料 22 药草补剂、天然产物、植物激素 黄嘌呤代谢物 23 甘草甜素 甘草 24 黄嘌呤 茶、巧克力 25 人参皂甙第 部分 人参 1 26 花青素 蓝莓 27 花青素 28 黄酮、儿茶酚 29 防腐剂 香料、甜味剂、防腐剂 软饮料 30 防腐剂、苯氧乙醇 31 蛋白质、多肽、氨基酸 蛋白质 小麦 32 蛋白质 小麦 33 （ BSA 牛血清白蛋白）裂解物，多肽 34 AAA氨基酸 35 3 ----------------------- 页面 4----------------------- 表1 常用HPLC分析的食品化合物 （续） 化合物组 主要分析物 基质 页码 控制使用的/危险的药物 药物 水 36 硝基呋喃类 家禽、虾 37 氟喹诺酮 牛肾 38 氯霉素 虾、蜂蜜 39 磺胺类药物 肉 40 磺胺 41 控制使用的 危险的其它物质 羟甲基糠醛 面包、谷类食品、 / HMF 42 酸奶 丙烯酰胺 饮用水 43 铬形态 44 高氯酸盐 水、蔬菜 45 三甲胺基砷 鱼类 46 控制使用的 危险的天然毒素 海藻毒素 甲壳类动物 / DSP 47 毒枝菌素、烟曲霉素 谷物 49 黄曲霉素 各种食品 50 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 种杀虫剂 蔬菜，水果 / 44 51 酸性除草剂 水 52 采后杀菌剂 柑橘 54 氯化烟碱类杀虫剂 蔬菜、水果 55 苯基脲类、三嗪类除草剂 水 56 脂溶性维生素 视黄醇异构体 58 脂溶性维生素 59 维生素D3 家禽饲料 60 脂溶性维生素 、 、 A D E 61 水溶性维生素 水溶性维生素 62 水溶性维生素 猫食 63 以上信息要点只是安捷伦应用报告中的一部分，在本指南后面的应用参考索引中 （第 到 页）可以查到更多的解决方案。所有应用报告都可以从安捷伦网站 78 90 www.agilent.com/chem/cn上下载。 4 ----------------------- 页面 5----------------------- 碳水化合物、糖、糖醇 主要分析物 4 碳水化合物 1 果糖 基质 2 葡萄糖 3 蔗糖 标样 4 6-O-a-D-吡喃葡糖基-D-果糖 5 海藻糖 参考文献 1 3 6 异麦芽糖 2 5 Robert Ricker,”High-Performance Carbohydrate Analysis,” 6 安捷伦科技出版物5988-6351EN, www.agilent.com/chem/cn 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 4 系统概况 LC系统 等度 1 3 检测 2 5 6 示差折光检测器 色谱柱 ZORBAX NH , 250 mm X 4.6 mm 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 2 色谱柱部件号 880952-708 或840300-908 条件 色谱柱 ZORBAX NH2 250 mm X 4.6 mm (安捷伦部件号880952-708) 流动相 乙腈: H O 2 流速 1 mL/min 检测器 示差折光检测器(RID) 5 ----------------------- 页面 6----------------------- 碳水化合物、糖、糖醇 主要分析物 Abundance 120000 糖醇 咖啡 蔗糖 80000 基质 40000 饮料 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 参考文献 Time (min) Abundance Hiroki Kumagai, “Application of liquid chromatography/ 300000 茶 蔗糖 mass spectrometry to the analysis of sugars and sugar alcohol,” 安捷伦科技出版物5988-4236EN, 200000 www.agilent.com/chem/cn 100000 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Time (min) Abundance 系统概况 140000 橘子汁 葡萄糖 100000 LC系统 果糖 60000 等度 20000 检测 1 2 3 4 5 6 7 8 9 MSD APCI- Time (min) 色谱柱 150 mm X 2 mm Asahipak NH -50 2D 2 色谱柱部件号 条件 色谱柱 150 X 2 mm Asahipak NH -50 2D 843300-908 2 流动相 乙腈 水 / (75/25) 流速 0.2 mL/min 柱温 40 °C 进样量 10 μL 柱后加入条件 以 柱后加入乙腈 氯仿 0.2 mL/min / (50/50) 检测器 MSD 四极杆 电离APCI (负离子) 扫描范围m/z 100-500 汽化室400 °C 雾化器压力40 psi 碰撞诱导解离电压20 V 电晕电流30 A 干燥气13 L/min, 350 °C SIM (m/z) 负离子 山梨醇217, 219 葡萄糖、果糖215, 217 木糖醇187, 189 蔗糖377,379 确证 MS图谱信息和RT 6 ----------------------- 页面 7----------------------- 碳水化合物、糖、糖醇 主要分析物 Norm. 右旋糖苷 右旋糖苷 14000 基质 12000 标准 10000 参考文献 8000 Heinz Goetz, “Quality control of dextran,” 安捷伦科技出版物 6000 杂质 5988-0118EN, www.agilent.com/chem/cn 4000 2000 0 条件 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 样品制备 样品溶解在流动相中 （浓度为0.1 %）并过滤 Time [min] 色谱柱 PL aquagel-OH MXA, 7.5 mm X 300 mm, 8 μm 图 1. 右旋糖苷样品分析 (安捷伦部件号79911GF-MXA) 串联 PL aquagel-OH 30A, 7.5 mm X 300 mm, 8 μm 分子量分布 (安捷伦部件号79911GF-083) 流动相 水 流速 1 mL/min 1.25 柱箱温度 25 °C 进样量 100 μL ] M g 检测器 示差折光 o 0.75 (RID) l [ 聚合物标准品 不同样品瓶中的聚环氧乙烷EasyCal 标准品用 W 于校正 安捷伦部件号 ( 5064-8280) 0.25 软件 化学工作站Plus带SEC数据分析软件 4 105 106 10 Molar mass [g/mol] 系统概况 分子量数据 rid1A LC系统 示差折光检测器1A 等度 Mn: 9.0685e4 g/mol Mw: 1.8436e5 g/mol 检测 Mz: 3.8872e5 g/mol Mv: 1.8436e5 mL/g 示差折光检测器 D: 2.0330e0 色谱柱 [n]: 0.000000 Vp: 1.4450e1 mL PL aquagel-OH MXA, 7.5 mm X 30 mm, 8 μm Mp: 9.2727e4 g/mol A: 2.0790e4 mL*V PL aquagel-OH 30A, 7.5 mm X 30 mm, 8 μm 1.0e4 D 1.679e-1 % 色谱柱部件号 2.8e5 D 8.0762e1 % 报告的子集—用户选择的色谱图部分的其它信息 7.8e5 D 1.0000e2 % 79911GF-MXA 及79911GF-803 0.0e D 0.000000 % 0.0e D 0.000000 % 图2. 典型的 GPC报告 7 ----------------------- 页面 8----------------------- 碳水化合物、糖、糖醇 主要分析物 淀粉 Mn Mw 淀粉 原料 * * 降解I 1000 4700 基质 降解II 910 6100 * 因超出排阻限未计算 标准 参考文献 nRIU Heinz Goetz and Peter Kilz, “Process Control of Starch,” 6000 原料 葡萄糖 淀粉 安捷伦科技出版物5988-0117EN, 5000 不当加工 II www.agilent.com/chem/cn 后的淀粉 4000 3000 I 2000 系统概况 1000 LC系统 0 等度 10 11 12 13 14 15 16 17 18 检测 Time [min] 示差折光检测器 图1 原料淀粉及不当加工后淀粉的重叠色谱图 色谱柱 Aq. GPC PSS Suprema 100 + 1000, 2 of 8 mm X 300 mm, 10 μm 色谱柱部件号 见应用报告 条件 样品制备 样品于 溶解在 流动相中 （浓度为 20 °C 1ml 。用 0.1 %w/w） Polymer Standards Services (PSS)的右旋糖苷标准进行精确的标准校正 色谱柱 PSS Suprema 100 + 1000 in series, 8 mm X 300 mm, 10 μm 流动相 0.1 M 硝酸钠 流速 1 mL/min 柱箱温度 25 °C 进样量 100 μL 检测器 示差折光检测器 软件 化学工作站Plus带SEC数据分析软件 8 ----------------------- 页面 9----------------------- 碳水化合物、糖、糖醇 主要分析物 碳水化合物 Norm 柠檬酸？ 乳糖 800 葡萄糖 基质 棉子糖 半乳糖 600 柠檬水 标准品 400 参考文献 柠檬水 200 Angelika Gratzfeld-Huesgen, “Analysis of Carbohydrates 果糖 in Lemonade using HPLC,” 安捷伦科技出版物5966-0637EN, 5 10 15 www.agilent.com/chem/cn Time [min] 图1 柠檬水中碳水化合物的分析 Norm 糖 萄 系统概况 180 糖 葡 乳 LC系统 160 糖 糖 子 乳 等度 140 棉 半 糖 果 检测 120 标准品 示差折光检测器 100 谷物提取物 色谱柱 80 D-纤维二糖 麦芽糖 蔗糖 标准品 BioRad HPXP 5 10 15 20 色谱柱部件号 Time [min] 与厂商联系 图2 谷物提取物中碳水化合物的分析 条件 色谱柱 300 X 7.8 mm Bio-Rad HPXP, 9 μm 流动相 水 柱箱温度 80 oC 流速 0.7 mL/min 检测器 示差折光(RID) 样品制备 直接进样 HPLC 方法性能 检测限 ， < 80 ng S/N = 2 保留时间重复性 （次进样）< 0.05 % RT 10 峰面积 （次进样） 10 <2% 9 ----------------------- 页面 10----------------------- 染料、着色剂、色素 主要分析物 苏丹染料 基质 食品 参考文献 液相色谱 质谱联用分 Yanyan Fang and Michael Zumwalt,“ / 析糖和糖醇类化合物 安捷伦科技出版物 ” 5989-4736CHCN, www.agilent.com/chem/cn 重复性 苏丹红 I 苏丹红 II 标准 RSD 准确度 RSD 准确度 (ppm) (%) (平均%) (%) (平均%) 0.2 6.04 97.31 5.76 97.61 0.4 6.98 101.95 5.64 100.27 0.8 4.61 104.75 6.12 103.78 1.6 5.17 102.53 5.99 105.92 2 6.12 96.77 4.74 94.72 图 显示苏丹红染料的 个峰的总离子流图 2 4 系统概况 实验 LC系统 二元梯度 仪器 Agilent 1100 系列LC/MSD TOF ，包含Agilent 1100 二元泵和多孔板自 检测 动进样器 MS TOF ESI+ LC 条件 色谱柱 色谱柱 ZORBAX XDB C18, 2.1 mm X 50 mm, 1.8 μm 安捷伦部件号: 922700-902 ZORBAX XDB-C18, 2.1 X 50 mm, 1.8 μm 流动相 A: 5 mM醋酸铵水溶液 色谱柱部件号 B: 乙腈 922700-902 梯度 0–3分钟95% B到98% B 3-5分钟98% B 后运行时间 3分钟 流速 0.5 mL/min MS 条件 离子化 ESI，正离子 干燥气温度 350 °C 干燥气流量 8 L/min 雾化器压力 45 psi 毛细管V (+ve) 4000 V 10 ----------------------- 页面 11----------------------- 染料、着色剂、色素 主要分析物 1. 黄 #5 C H N Na O S MW=534 16 9 4 3 9 2 2. 红 #40 C H N Na O S MW=496 FDC食品染料、防腐剂 蓝 18 14 2 2 8 2 3. #1 C H N Na O S MW=760 37 34 2 2 9 3 4. 尼泊金丙酯 C H O MW=180 10 12 3 基质 5. 红 #3 C H I Na O MW=878 20 4 4 2 5 标准样品 mAu 1 800 参考文献 600 2 ZORBAX Eclipse XDB-C18 Robert Ricker, “FD&C Colors,” 安捷伦科技出版物 5988-6355EN, www.agilent.com/chem/cn 400 3 200 4 5 0 0 1 2 3 4 5 min 系统概况 LC系统 条件 四元梯度 色谱柱 ZORBAX XDB-C18, 50 mm X 4.6 mm, 3.5 μm, 检测 (安捷伦部件号935967-902) DAD 流动相 A: 0.1% TFA 含三乙胺(TEA) B: 甲醇 色谱柱 梯度 4分钟17% B到100% B ZORBAX XDB-C18, 50 mm X 4.6 mm, 3.5 μm 流速 1 mL/min 色谱柱部件号 柱温 室温 935967-902 检测器 DAD，检测波长254nm。 11 ----------------------- 页面 12----------------------- 染料、着色剂、色素 主要分析物 花青素 基质 圆白菜 参考文献 电喷雾和大气压化学电离源液相质谱用于 Masahiko Takino, “ / 天然食品色素的分析 安捷伦科技出版物 ” 5968-2979CHCN, www.agilent.com/chem/cn 系统概况 LC系统 二元梯度 图2. 红球甘蓝着色剂的总离子流图和提取离子流图 检测 + + ， MSD ESI APCI LC条件 色谱柱 色谱柱 250 X 2.1 mm Inertsil ODS3, 5 μm Inertsil ODS3, 2.1 mm X 250 mm, 5 μm 流动相 A: 1% 甲酸 色谱柱部件号 乙腈水 B: / 推荐SB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm 梯度 从5% B开始， 935967-902 30分钟时达到50%B 流速 0.2 mL/min 柱温 40 °C 进样量 10 μL MS 条件 离子源 ESI 离子化方式 正离子 V 电压 4000 V cap 雾化器压力 50 psig 干燥气流量 10 L/min 汽化室温度 350 °C 电晕电流 4 μA 干燥气温度 350 °C 扫描范围 100–1200 amu 步长 40.1 峰宽 0.15 分钟 时间过滤器 打开 碰撞诱导解离电压 200 V 待续 12 ----------------------- 页面 13----------------------- 图 1. 红球甘蓝着色剂中主要色素的结构 图3. 红球甘蓝着色剂中主要色素的质谱图 13 ----------------------- 页面 14----------------------- 脂肪和油脂 主要分析物 磷脂 缩写 磷脂酰乙醇胺 PE 磷脂 磷脂酰丝氨酸 PS 基质 磷脂酰肌醇 PI 卵磷脂 PC 大豆 mV PE PS PI 参考文献 2000 1750 PC Cliff Woodward and Ron Majors, “The HPLC Preparative 1500 Scale-Up of Soybean Phospholipids,” 安捷伦科技出版物 1250 Z2 5989-2848EN, www.agilent.com/chem/cn 1000 750 Z1 500 μg 500 200 μg 100 μg 250 50 μg 系统概况 25 μg 0 LC系统 5 10 15 20 25 30 35 min 制备/35900E 图3. Agilent prep 4.6 X 150 mm, 10-μm – 大豆磷脂混合标准, – 载样能力 检测 ELSD (ESA), 某些用MSD 色谱柱 mV PE PS PI Prep SIL, 4.6 mm X 150 mm, 10 μm 2000 PC 21.2 mm X 150 mm, 10 μm 1750 色谱柱部件号 1500 Z1 Z2 见应用报告 1250 1000 750 20 mg 500 10 mg 4 mg 250 2 mg 1 mg 0 0 5 10 15 20 25 30 35 min 图6. Agilent prep 21.2 X 150 mm, 10-μm –大豆磷脂混合标准, –载样能力 条件 流动相 流动相 正己烷异丙醇甲醇 A = 95:2.5:2.5% - - 异丙醇甲醇 B = 40:60% - 两种溶剂中均含10-mM醋酸铵 14 ----------------------- 页面 15----------------------- 脂肪和油脂 主要分析物 1. 甘油三月桂酸酯 Abundance 2 2. 甘油三亚油酸酯 甘油酸三酯 40000 3. 甘油三肉豆蔻酸酯 4. 甘油三油酸酯 基质 35000 6 5. 甘油三棕榈酸脂 5 4 6. 甘油三硬脂酸酯 标准 30000 3 25000 1 参考文献 20000 液相色谱 质谱联用分析甘油三酯 15000 Hiroki Kumagai, “ / 类化合物 安捷伦科技出版物 10000 ” 5988-4235CHCN, www.agilent.com/chem/cn 5000 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 min 图1 甘油酸三酯标准品的总离子流图，各0.2 ppm 系统概况 LC系统 439.5 月桂酸甘油酯 90 三棕榈酸甘油酯 90 551.5 等度 50 50 检测 183 305 MSD APCI+ 150 350 550 750 150 350 550 750 色谱柱 90 油酸甘油酯 603.5 495.5 豆蔻酸甘油酯 90 Develosil ODS OG-3, 4.6 mm X 75 mm 50 50 211 色谱柱部件号 881 150 350 550 750 150 350 550 750 推荐SB-C18, 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 866953-902 90 甘油三亚油酸酯599.5 879.8 (MH)+ 90 三硬酯酸甘油酯 607.5 50 50 305 150 350 550 750 150 350 550 750 图2 甘油酸三酯标准品的质谱图，各0.2 ppm 条件 色谱柱 Develosil ODS OG-3, 75 mm X 4.6 mm 流动相 乙腈 水 （ ） / 98/2 流速 1 mL/min 柱温 40 °C 进样量 15 μL 梯度 分钟时， ， 0 20% A 30分钟100% A 检测器 MSD 四极杆SL 电离APCI+ 扫描范围100-1000 amu 汽化室400 °C 雾化器压力50 psi 碰撞诱导解离电压160V 干燥气4 L/min 350 °C 确证 MS图谱信息和RT 15 ----------------------- 页面 16----------------------- 脂肪和油脂 主要分析物 684.65 碰撞诱导解离电压 = 80 8000 甘油酸三酯 6000 4000 基质 2000 439 467 502 食用油 350 400 450 500 550 600 650 700 684.65 参考文献 8000 碰撞诱导解离电压 = 150 467 丢失C12 脂肪酸 6000 大气压化学电离源液相 质谱用于食用油中甘 Doug McIntyre, “ / 4000 439 丢失 脂肪酸 油三酸酯的分析 安捷伦科技出版物 C14 ” 5968-0878CHCN, 2000 www.agilent.com/chem/cn 411 495 350 400 450 500 550 600 650 700 图1. 提高碰撞诱导解离电压对椰子油中混合甘油酸三酯的影响。 碎片质量数和比例与 种 脂肪酸和 种 脂肪酸一致 2 C12 1 C14 Abundance 100000 甘油三亚油酸酯 90000 (C18:2,[cis,cis]-9,12) 80000 70000 甘油酸三反油酸酯 三油酸甘油酯 60000 (C18:1,[反式]-9) (C18:1,[trans]-9) 色谱条件 50000 硬脂酸甘油三酯 色谱柱 200 mm X 2.1 mm Hypersil MOS, 5 μm 40000 (C18:0) 流动相 A = 60:40 水：异丙醇+ 25 mM 甲酸铵 B = 10:10:80 水：异丙醇： 30000 正丁醇+ 25 mM 甲酸铵 20000 梯度 从30% B开始 10000 1.5分钟30% B 25 分钟60% B 16.00 17.00 18.00 19.00 20.00 21.00 22.00 23.00 min 28分钟100% B 流速 0.25 mL/min 图1 . 四种甘油酸三酯分离的总离子流图 柱温 50 °C 注：顺反异构体得到良好分离 进样量 1.5 μL MS 条件 离子源 APCI 系统概况 离子化方式 正离子 Vcap 4000 V LC系统 雾化器压力 50 psig 二元梯度 干燥气流量 4 l/min 检测 干燥气温度 325 °C + 电晕电流 4 μA MSD APCI 汽化室 300 °C 色谱柱 扫描范围 300–1100 m/z Hypersil MOS, 2.1 mm X 200 mm, 5 μm 步长 0.1 m/z 色谱柱部件号 峰宽 0.3 min 推荐SB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm 时间过滤器 打开 830990-902 碰撞诱导解离电压 80 V 16 ----------------------- 页面 17----------------------- 脂肪和油脂 主要分析物 向日葵油 L L 140 L L L 甘油三酸酯及其过氧化物 * 过氧化物 L O O * Hydroperoxides O 120 * ] d 100 基质 e l L a L c P s [ 80 e c n 食用油 a 60 * O b r O o * s O O b 40 O A * S 参考文献 20 * * 215 nm 240 nm 0 Rainer Schuster, “Analysis of Unsaturated Triglycerides 5 10 15 20 25 using HPLC,” 安捷伦科技出版物5966-0744E, Time [min] www.agilent.com/chem/cn 图 1. 陈年向日葵油的甘油三酸酯图谱。240 nm 波长下增强的信号代表过氧化物 橄榄油 Olive oil 系统概况 质量好 质量差 Good quality Poor quality mAU O L O mAU O L O L O O L O O LC系统 L O O L O O 20 20 四元梯度 O 检测 15 15 L O L O S 个通道 O DAD 3 10 10 O S 色谱柱 215 nm 5 L 5 L Hypersil MOS, 2.1 mm X 200 mm, 5 μm L 215 nm 色谱柱部件号 0 280 nm 0 280 nm 推荐SB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm 13.0 23.0 13.0 23.0 Time [min] Time [min] 830990-902 图2. 橄榄油的分析。280 nm波长下的响应代表共轭双键，表示油的质量差 条件 色谱柱 200 X 2.1 mm Hypersil MOS, 5 μm 流动相 A = 水 乙腈 甲基特丁基醚 B = / - (9:1) 梯度 0分钟87% B; 25分钟100% B 后运行时间 4 分钟 流速 0.8 mL/min 柱温 60 oC 进样量 1 μL 标准 吸收 和 的 吸收检测甘油三酸酯， UV 200 nm 215 nm UV 240 nm检测过氧化物， 检测维生素E 280 nm 和降解的甘油三酸酯 （含三个双键的脂肪酸） 样品制备 样品溶解在四氢呋喃 （ ）中 THF HPLC方法性能 饱和甘油三酸酯检测限 >10 μg 重复性 （次） RT 10 <0.7 % 峰面积重复性 次 （ ） 10 <6 % 17 ----------------------- 页面 18----------------------- 香料、甜味剂、有机酸 酯 甲 酸 氨 丙 主要分析物 mAU 苯 酰 香料、甜味剂、防腐剂 200 因 氨醛 盐 盐 精 啡 冬草 酸 酯 门香 150 糖 咖 天 - 苯 酸 醛 - - 2 基质 3 2 7- 5 甲- 梨 甲 9 3 9 9. 5 山 7. 8. 6 2 5 苯 100 0 知 1 2. 4. 1- 0- 软饮料 未 3 8 7 - 6. 2 50 4 3 4. 5 2 参考文献 1. 0 Michael Woodman, “Rapid Screening and Analysis of -50 Components in Nonalcoholic Drinks,” 安捷伦科技出版物 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 min 5989-5178EN, www.agilent.com/chemFlo/cn 图2. 用3.0 mm X 50 mm, 1.8-μm ZORBAX SB-C18柱对软饮料添加剂进行梯度分离 酯 甲 mAU 酸 因 氨 600 啡 丙 精 咖- 苯 醛 500 糖 1 酰 草 条件 0 氨 - 7 香 9 6. 冬 - 盐 8 5 系统 400 3. 门 5 酸 4 9 盐 天 . 醛 9 苯 - 酸 系列高分离度快速液相色谱包括 甲 Agilent 1200 , : 300 4 甲 0 - 梨 1. 3 山 苯- G1379B微量脱气机 8 5 - 2 200 0. 9 1 2 9 5. 二元泵 1 4 5 G1312B SL 2. 1 100 1 1 1 自动进样器 带温度控制 0 4 G1367C HiP ALS SL, 6 9 . . 5 1 0 G1316B柱温箱SL 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min 二极管阵列检测器 流通池见各色谱图 G1315C UV/VIS SL, 化学工作站 位 版 32 B.02.01 图1. 用4.6 mm X 250 mm, 5-μm ZORBAX SB-C18柱对软饮料添加剂进行梯度分离 色谱柱 Agilent ZORBAX SB-C18, 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 系统概况 Agilent ZORBAX SB-C18, 3.0 mm X 50 mm, 1.8 μm 流动相条件 LC系统 有机溶剂 乙腈(ACN)或ACN-含0.1% 甲酸 1200SL 水相溶剂 20 mm磷酸于Milli-Q水中，含氢氧化铵或含 检测 0.1% 甲酸的Milli-Q 水 DAD 梯度条件 色谱柱 梯度斜率 每个柱体积2.8% ZORBAX SB-C18, 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 流速及梯度时间见各色谱图 3 mm X 50 mm, 1.8 μm (600 bar) 样品 色谱柱部件号 1. 糖精、咖啡因、天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯、香草醛、苯甲酸、山梨酸、 苯甲醛标准混合物，各 ，溶于 甲醇水中 50 μg/mL 1:1 / 880975-902 (5 μm) 2. 各种软饮料，需要时除二氧化碳 827975-302 (1.8 μm) 18 ----------------------- 页面 19----------------------- 香料、甜味剂、有机酸 主要分析物 mAU 酸 二 有机酸 60 烯 酸酸 酸酸 丁 石果 檬珀 反 基质 50 酒- 苹 酸酸 柠- 琥 2- 乳醋 - 0 7 - - - 9 9 5. 5 2 2 8 4 8. 5 2 3 9. 1 1 3 1 2 . 1 2. 2. 4. 3 食品 40 2 2 参考文献 30 M.A. van Straten, H.A. Claessens, and A. Dams, 20 “Analysis of Organic Acids in Aqueous Samples,” 10 安捷伦科技出版物5989-1265EN, 2 0 1 6 5 6 . . 1 1 www.agilent.com/chem/cn 0 2 4 6 图 标准混合物 。 系统概况 2. 1 LC系统 mAU 四元梯度 酸 检测 120 檬 柠 DAD 100 色谱柱 ZORBAX SB-Aq, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 80 色谱柱部件号 60 酸 883975-914 果 苹 40 C 素 酸 20 生 酸 二 维 珀 烯 琥 丁 反 0 1 2 3 4 5 6 Time [min] 图4. 橘子汁 条件 色谱柱 ， ZORBAX SB-Aq, 4.6 mm X 150 mm 5 μm 流动相 磷酸盐缓冲液 乙腈 20 mM / = 99/1 (v/v) 流速 1.0 mL/min 进样量 1 μL 柱温 25 °C 检测 检测波长 窗口 参比波长 UV-DAD / 210/8 nm, 及带宽360/80 nm 样品制备 0.45 μm滤膜过滤 19 ----------------------- 页面 20----------------------- 香料、甜味剂、有机酸 主要分析物 2 调味剂 0.6 冰蓝李施德样品 基质 1. 未知 2. 苯甲酸 嗽口水 3. 水杨酸甲酯 0.5 4. 香芹酮 参考文献 5. 未知 6. 麝香草酚 7. 茴香脑 Robert Ricker, “Flavoring Agents,” 安捷伦科技出版物 0.4 1 5988-6353EN, www.agilent.com/chem/cn 0.3 7 0.2 系统概况 4 LC系统 0.1 二元梯度 3 6 检测 5 0.0 DAD 色谱柱 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ZORBAX SB-Phenyl, 2.1 mm X 50 mm, 5 μm Minutes 色谱柱部件号 860975-912 条件 色谱柱 ZORBAX SB-Phenyl, 50 mm X 2.1 mm, 5 μm (安捷伦部件号860975-912) 流动相 乙腈水 0.3% TFA: / (65:35) 流速 0.3 mL/min 柱温 室温 检测器 DAD, 检测波长254 nm 20 ----------------------- 页面 21----------------------- 香料、甜味剂、有机酸 主要分析物 0.14 1 半挥发性香料 香料样品 1. 苯乙酮 基质 0.12 2. 桂醛 标准 3. 丁子香酚 4. 桂醛杂质 参考文献 0.10 5. 肉桂酸乙酯 6. 对异丙基苯 Robert Ricker,"Aromatics,” 安捷伦科技出版物 5988-6352EN, www.agilent.com/chem/cn 0.08 0.06 2 5 0.04 3 系统概况 0.02 LC系统 4 6 等度 检测 0.00 DAD 色谱柱 0 5 10 15 20 ZORBAX XDB-Phenyl, 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm Minutes 色谱柱部件号 963967-912 条件 色谱柱 ZORBAX XDB-Phenyl, 150 mm X 4.6 mm, 3.5 μm (安捷伦部件号963967-912) 流动相 水 甲醇 : (40:60) 流速 1 mL/min 柱温 35 °C 检测器 DAD, 检测波长254 nm 21 ----------------------- 页面 22----------------------- 香料、甜味剂、有机酸 主要分析物 2 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯及其代谢物 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯，降解物 1 1. 苯丙氨酸哌嗪乙酸 2. 5-苄基-3, 6-二氧-2-哌嗪乙酸 3. 天门冬氨酸-苯丙氨酸二肽 基质 4. 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯 可乐类饮料 3 4 参考文献 Robert Ricker, “Aspartame: Metabolites and Applications,” 1 安捷伦科技出版物5988-6349EN, 健怡可乐 www.agilent.com/chem/cn 1. 咖啡因 2 2. 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯 3. 未知 3 系统概况 LC系统 等度 检测 等同的甜味剂 1 1. 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯 DAD 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 色谱柱部件号 866953-902 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Minutes 条件 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 75 mm X 4.6 mm, 3.5 μm, (安捷伦部件号866953-902) 流动相 乙腈水 0.1% TFA: / (85:15) 流速 1 mL/min 柱温 35 °C 进样量 1 μL 检测器 DAD, 检测波长210 nm 22 ----------------------- 页面 23----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 主要分析物 mAU Eclipse Plus 1 2 3 80 4 6 40 5 黄嘌呤代谢物 0 0 2 4 6 8 min mAU 基质 80 竞争品牌 G 40 0 标准 0 2 4 6 8 min mAU 80 竞争品牌 S 参考文献 40 0 0 2 4 6 8 min John W. Henderson Jr. and William J. Long, ”用Eclipse mAU 80 竞争品牌 L Plus C18 柱分离黄嘌呤类化合物及其代谢物获得良好峰形” 40 安捷伦科技出版物5989-5237CHCN, 0 0 2 4 6 8 min www.agilent.com/chem/cn mAU 竞争品牌 X 80 40 0 0 2 4 6 min 系统概况 LC系统 分析物洗脱顺序: 等度 1. 1-甲基黄嘌呤 检测 2. 可可碱 3. 茶碱 DAD 4. b-羟乙基茶碱 色谱柱 5. 3-丙基黄嘌呤 Eclipse Plus C18, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 6. 咖啡因 色谱柱部件号 图 1. 用各种C18柱分离黄嘌呤类化合物 959993-902 条件 色谱柱 Eclipse Plus C18, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm, (安捷伦部件号959993-902) 流动相 A: 25 mM 磷酸盐 B: 乙腈(90:10) 流速 1 mL/min 柱温 40 °C 检测器 DAD 23 ----------------------- 页面 24----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 主要分析物 用 柱 （ ） ZORBAX SB-C18 4.6 X 250-mm 5 μm Analysis of licorice root extract B using a 分析甘草提取物B 甘草甜素 ZORBAX SB-C18 4.6 × 250-mm column, 5 μm 基质 mAU 70 甘草 6 60 1 0 . 2 2 参考文献 50 GA 40 Bernard Permar and Ronald E. Majors, “The High-Resolu- 30 tion Reversed-Phase HPLC Separation of Licorice Root Extracts Using Long Rapid Resolution HT 1.8-μm Columns,” 20 安捷伦科技出版物5989-4907EN, 10 www.agilent.com/chem/cn 0 25 30 35 40 45 min 用ZORBAX SB-C18 RRHT 4.6 X 150-mm柱分析 COOH Analysis of licorice root extract B using a 甘草提取物B ZORBAX SB-C18 RRHT 4.6 × 150-mm column mAU 90 COOH 80 O GA O 70 60 COOH O 50 O 40 30 20 图1. 甘草酸的结构 16 18 20 22 24 26 28 30 min HPLC 条件 仪器 Agilent 1200SL 系列高分离度快速液 系统概况 相色谱系统 检测器 多波长检测器(MWD), LC系统 254 nm/100 BW, 450 nm 参比波长 1200SL 流动相 A = 1% 醋酸水溶液 B = 1% 醋酸乙腈溶液 检测 ZORBAX SB-C18柱梯度条件 DAD 常规柱 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 色谱柱 分钟内， 到 50 5% 100% B ZORBAX SB-C18 RRHT, 4.6 mm X 150 mm, 1.8 μm RRHT 4.6 mm X 150 mm, 1.8 μm 分钟内， 到100% B 30 5% 色谱柱部件号 流速 1.0 mL/min 829975-902 温度 室温 24 ----------------------- 页面 25----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 主要分析物 mAU ZORBAX StableBond (SB)-C18 1.8 μm 1 40 2 3 4 黄嘌呤类化合物 20 0 0.5 1 1.5 2 2.5 min 基质 SB-Phenyl 1.8 μm* mAU 1 30 2 3 4 茶、巧克力 20 10 0 0.5 1 1.5 2 2.5 min 参考文献 mAU 100 1,2 3 4 SB-CN 1.8 μm John W. Henderson and Ronald E. Majors, “用高分离度快速 50 液相色谱系统进行黄嘌呤类化合物的高通量分析” 0 0.5 1 1.5 2 2.5 min 安捷伦科技出版物5989-4857CHCN, mAU 1 2,3 www.agilent.com/chem/cn 40 4 ZORBAX Bonus RP 100 mm 3.5 μm 20 0 0.5 1 1.5 2 2.5 min 系统概况 化合物： LC系统 1 1-甲基黄嘌呤 1200SL 2 1,3-二甲基尿酸 3 3,7-二甲基黄嘌呤 检测 4 1,7-二甲基黄嘌呤 DAD 2-μL 流通池 * 试生产批次 色谱柱 图2 . ZORBAX 固定相分离黄嘌呤化合物的选择性比较 RRHT, 1.8 μm 各种色谱柱 色谱柱部件号 各异 条件 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 4.6 X 50 mm, 1.8 μm SB-Phenyl, 4.6 X 50 mm, 1.8 μm ZORBAX Bonus-RP, 4.6 X 50 mm, 1.8 μm Bonus-RP, 4.6 X 100 mm, 3.5 μm 流动相 A =含0.2% 甲酸的水溶液 B =含0.2% 甲酸的乙腈溶液 等度组成 98% A 2% B (v/v) 流速 1.5 mL/min 进样量 分别为2, 4, 6 μL 检测器 DAD, 254 nm 流通池 3 μL, 2-mm 光程 25 ----------------------- 页面 26----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 主要分析物 2-μL UV 流通池 人参皂甙第1部分 1.8-μm SB C18 柱 DAD SL 低延迟 基质 体积热 连接MS 交换器 柱温箱 人参 SL型高性能自动 脱气机 进样器 参考文献 SL型二元泵 温控模块 Bernard Permar and Ronald E. Majors, “Analysis of a Com- plex Natural Product Extract From Ginseng – Part 1: Struc- 650 mm x 0.17 mm 毛细管 320 mm x 0.12 mm 毛细管 ture Elucidation of Ginsenosides by Rapid Resolution LC–ESI TOF with Accurate Mass Measurement,” 安捷伦科 图1. 连接MS用的安捷伦1200系列二元泵LC系统 （低延迟体积配置） 技出版物5989-4506EN, www.agilent.com/chem/cn 表1. 人参皂甙的经验分子式和结构解析获得的质量准确度 9.0e6 Rd 测定质量 计算质量 实验式 质量准确度 质量准确度 8.0e6 Re [mDa] [ppm] 7.0e6 Rb 1 1109.6129 1109.6108 C54H93O23 2.10 –1.90 6.0e6 Rb2 s Rc 1091.6012 1091.6002 C54H91O22 1.00 –0.91 p c y 5.0e6 Rf 785.5047 785.5051 C H O –0.40 0.53 t 42 73 13 i s 767.4950 767.4946 C H O 0.40 –0.58 n 4.0e6 42 71 12 e t n 749.4854 749.4840 C H O 1 –1.40 1.88 I 42 69 1 3.0e6 425.3784 425.3783 C30H49O 0.10 –0.14 F 407.3679 407.3678 C30H47 0.10 –0.30 2.0e6 11 343.1248 343.1240 C12H23O11 0.80 2.23 1.0e6 325.1136 325.1135 C12H21O10 0.10 –0.39 0.0 19.0 21.0 23.0 25.0 27.0 29.0 31.0 33.0 35.0 Time, min 图3. 含有亚洲人参提取物主成分的RR-LC-TOF基峰色谱图 系统概况 方法： LC系统 系列二元泵系统 操作条件如下： Agilent 1200 SL 1200SL 溶剂A 水+ 0.1 % TFA 溶剂 乙腈 流速： B + 0.1 % TFA 0.5 mL/min 检测 梯度 0 分钟5 % B, 1分钟5 % B, MS TOF ESI+ 60 分钟85 % B, 色谱柱部件号 61分钟95 % B, 70 分钟95 % B SB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 1.8 μm 停止时间 70分钟 色谱柱部件号 后运行时间 15分钟 820700-902 26 ----------------------- 页面 27----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 主要分析物 Agilent Prep-C18, 21.2 × 250 mm, 10 μm (部件号 410910-102) 花青素 基质 1A 蓝莓 10 20 30 40 50 60 70 80 min 参考文献 Agilent Prep-C18, 4.6 × 250 mm, 5 μm Cliff Woodward, “Scale-Up of Anthocyanin Separations and (部件号 440905-902) Re-Analysis of Collected Fractions on an Agilent Prep-C18 Column,” 安捷伦科技出版物5989-0591EN, 1B www.agilent.com/chem/cn 10 20 30 40 50 60 70 80 min 图1. 安捷伦制备柱的可缩放性 Agilent Prep-C18 21.2 × 250 mm, 10 μ 斜率设置 条件 1A 阈值设置 两条垂直虚线之间收集的实际峰 色谱柱 Agilent Prep-C18, 21.2 X 250 mm, 10 μm 温度 室温 DAD 波长 525 nm 5 10 15 20 25 30 35 40 min 进样 2000 μL Agilent Prep-C18 样品 蓝莓提取物46.1 mg/mL总溶解的固体 4.6 × 250 mm, 5 μ 花青素-3-半乳糖苷 (~5 mg/mL 花青素) 馏分1再次色谱分析 流速 21.2 mL/min 1B 5 10 15 20 25 30 35 40 min 色谱柱 Agilent Prep-C18, 4.6 X 250 mm, 5 μm Agilent Prep-C18 温度 室温 4.6 × 250 mm, 5 μ DAD 波长 525 nm 花青素-3-糖苷 进样 100 μL 馏分2再次色谱分析 样品 蓝莓提取物46.1 mg/mL总溶解的固体 5 10 15 20 25 30 35 40 min (~5 mg/mL 花青素) 流速 1.0 mL/min 图2. 收集馏分并再次进行色谱分离，以检查纯度 馏分纯度详见应用报告 流动相 A = 0.1% TFA水溶液 B = 0.1% TFA 甲醇溶液 梯度时间表 系统概况 时间 分钟 溶剂 ( ) % B LC系统 0.00 23.0 制备 35.00 26.0 85.00 53.5 检测 DAD 色谱柱 Prep-C18, 21.2 mm X 250 mm, 10 μm, 与4.6 mm X 250 mm, 5 μm 色谱柱部件号 410910-102 和440905-902 27 ----------------------- 页面 28----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 主要分析物 时间 B% 花青素 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 0 23% 35 26% 基质 97 60% 标准 参考文献 Robert Ricker, “High-Efficieny and High-Speed Separation of Natural Anthocyanins,” 安捷伦科技出版物5988-6362EN, www.agilent.com/chem/cn 0 10 20 30 40 50 60 70 Time (min) 时间 B% 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 0 23% 21 26% 58.2 60% 系统概况 LC系统 四元或二元梯度组件 检测 DAD 0 5 10 15 20 25 30 35 40 Time (min) 色谱柱 时间 B% ZORBAX SB-C18, 4.6 mm, 5 μm 与3.5 μm 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 0 23% 色谱柱部件号 10.5 26% 29.1 60% 见应用报告 0 5 10 15 20 Time (min) 条件 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 250 mm X 4.6 mm, 5 μm, (安捷伦部件号880975-902) ZORBAX SB-C18, 150 mm X 4.6 mm, 3.5 μm, (安捷伦部件号863953-902) ZORBAX SB-C18, 75 mm X 4.6 mm, 3.5 μm, (安捷伦部件号866953-902) 流动相 A: 3% 磷酸, B: 100% 甲醇 梯度 97分钟内，从23% B到60% B 58分钟内，从23% B到60% B 29分钟内，从23% B到60% B 流速 1 mL/min 柱温 30 °C 进样量 20 μL 检测器 DAD, 检测波长525 nm 28 ----------------------- 页面 29----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 主要分析物 茶酸混合物 绿茶提取物儿 20 类黄酮、儿茶酸 2 2 1. 儿茶素 2. 表儿茶酸 基质 15 3. 没食子酸儿茶素 3 4 50 4. 儿茶酚 标准 5. 没食子酸表儿茶素 10 参考文献 未知物 5 25 Robert Ricker, “Epigallocatechin 3-O-gallate extract 5 1 1 from green tea,” 安捷伦科技出版物5988-6357EN, 3 4 www.agilent.com/chem/cn 0 0 0 5 10 15 0 5 10 15 Minutes Minutes 系统概况 LC系统 条件 四元或二元梯度组件 色谱柱 ZORBAX SB-C8, 4.6 mm, 150 mm X 3.5 μm 检测 (安捷伦部件号863953-906) 流动相A 75% ，含0.1%三氟醋酸水溶液 DAD 流动相B 25% 甲醇 色谱柱 流速 1 mL/min ZORBAX SB-C8, 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 柱温 40 °C 色谱柱部件号 进样量 5 μL 检测器 DAD, 检测波长280 nm 863953-906 29 ----------------------- 页面 30----------------------- 防腐剂 酯 甲 主要分析物 mAU 酸 因 氨 600 啡 丙 香料、甜味剂、防腐剂 精 咖- 苯 醛 500 糖 1 酰 草 - 0 氨 盐 7 香 基质 9 6. 冬 - 酸 8 5 盐 400 3. 门 5 香 4 9 酯 天 . 醛 9 息 - 酸 软饮料 300 4 安 梨 甲 0 - 1 苯 . 3 山 - 8 5 - 2 200 0. 9 1 2 9 5. 参考文献 1 4. 5 2 1 100 1 1 1 4 0 6 9 . . 5 Michael Woodman, “Rapid Screening and Analysis of 0 1 Components in Nonalcoholic Drinks,” 安捷伦科技出版物 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min 5989-5178EN, www.agilent.com/chem/cn 图 1. 用4.6 X 250 mm, 5 μm ZORBAX SB-C18对软饮料添加剂进行梯度分离 酯 甲 酸 氨 丙 苯 mAU 酰 系统概况 200 氨醛 盐 因 冬草 酸 盐 精 啡 门香 香 酯 LC系统 150 糖 咖 天 - 息 酸 醛 - - 2 - 安 3 2 7 5 - 梨 甲 9 3 9 9. 5 山 1200SL 7. 8. 6 2 5 苯 100 0 知 1 2. 4. 1- 0- 未 3 8 7 检测器 - 6. 2. 50 4 3 4 5 2 . DAD 1 0 色谱柱 -50 ZORBAX SB-C18, 4.6 mm X 250 mm, 5 μm; 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 min 3 mm X 50 mm, 1.8 μm (600 bar) 色谱柱部件号 图2. 用3.0 X 50 mm, 1.8-μm ZORBAX SB-C18对软饮料添加剂进行梯度分离 827975-302 (1.8 μm), 880975-902 (5 μm) 条件 系统 系列高分离度快速液相色谱包括 Agilent 1200 , : G1379B 微量脱气机 G1312B 二元泵SL 自动进样器 带温度控制 G1367C HiP ALS SL, G1316B 柱温箱SL 二极管阵列 流通池见各色谱图 G1315C UV/VIS SL, 化学工作站32-bit 版本B.02.01 色谱柱 Agilent ZORBAX SB-C18, 4.6 mm X 250 mm, 5 μm Agilent ZORBAX SB-C18, 3.0 mm X 50 mm, 1.8 μm 流动相条件 有机溶剂 乙腈(ACN) 或乙腈含0.1% 甲酸 水相溶剂 20 mm磷酸溶于Milli-Q水中，用氨水调pH 至3.65 ，或Milli-Q水含0.1% 甲酸 梯度条件 梯度斜率 每个柱体积2.8% 流速和梯度时间见每张色谱图 样品 1. 糖精、咖啡因、天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯、香草醛、苯甲酸、山梨酸、 苯甲醛标准混合物，各 ，溶于 甲醇水中 50 μg/mL 1/1 / 2. 各种软饮料，用时脱碳酸 30 ----------------------- 页面 31----------------------- 防腐剂 主要分析物 800 尼泊金酯类防腐剂苯氧乙醇 2 , 600 基质 3 U A 400 1 MEP 标准 m 2 2PX 6 3 ETP 参考文献 200 1 4 5 4 PRP 5 IBP Coral Barbas, Javier Rupérez, Andre Dams, and 0 6 BTP Ronald E. Majors, “Separation of Paraben Preservatives by Reversed-Phase HPLC,” 安捷伦科技出版物5989-3635EN, 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 www.agilent.com/chem/cn Minutes 图1. 反相HPLC分离防腐剂 表1. 防腐剂化合物的结构和浓度 O CH OH 条件 2 2PX: 2-苯氧乙醇 CH2 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB-C18 RR色谱柱， (1.4 mg/mL) 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 流动相 溶剂 水 A: 溶剂 甲醇 O B: 梯度 时间 % 甲醇 C 0 38 OCH MEP: 对羟基苯甲酸甲酯 3 5 38 (0.30 mg/mL) 6 60 16 60 HO 17 62 O 20 38 C 流速 0.8 mL/min ETP: 对羟基苯甲酸乙酯 OC2 H5 温度 40 °C (0.07 mg/mL) 检测器 UV 254 nm 进样量 5 μL HO O CO CH 2 CH CH PRP: 对羟基苯甲酸丙酯 2 3 (0.04 mg/mL) HO 系统概况 O CH 3 LC系统 CO CH IBP: 对羟基苯甲酸异丁酯 CH2 CH3 四元或二元梯度组件 (0.04 mg/mL) 检测 HO DAD O 色谱柱 CO C H ZORBAX XDB-C18, 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 4 9 BTP: 对羟基苯甲酸丁酯 色谱柱部件号 (0.08 mg/mL) 963967-902 HO 31 ----------------------- 页面 32----------------------- 蛋白质、多肽、氨基酸 主要分析物 ZORBAX 300 SB-C8 蛋白质 梯度: 23%-48% 乙腈 基质 0.21 5 小麦 A 7* 3 10 0 1 x 参考文献 v m 0.15 , m n Robert Ricker, “Stationary-Phase Selectivity Comparison: 0 1 2 High-Molecular-Weight, Alkylated, Wheat Glutenin, Protein e, c 安捷伦科技出版物 n 9 Subunits,” 5988-6358EN, a b 0.09 2* r o www.agilent.com/chem/cn s b A w-麦胶蛋白 0.03 系统概况 0 20 40 60 Time (minutes) LC系统 四元或二元梯度组件 ZORBAX 300 SB-CN 检测 梯度: 23%-48% 乙腈 DAD 0.50 色谱柱 B 5 7* ZORBAX 300 SB-CN, 300 SB-C8 3 0 1 x w-麦胶蛋白 色谱柱部件号 v 0.35 m , 883995-906, 883995-905 m 10 9 n 0 1 2 , e c 2* n a b 0.20 r o s b A 0.05 0 20 40 60 Time (minutes) 条件 色谱柱 ZORBAX 300 SB-CN, 300 SB-C8 4.6 mm X 150 mm (安捷伦部件号883995-906, 883995-905) 流动相 同上含0.1% TFA, 水 梯度 60分钟 流速 1.0 mL/min 温度 50 °C 检测器 DAD 32 ----------------------- 页面 33----------------------- 蛋白质、多肽、氨基酸 主要分析物 蛋白质 I 基质 70° H K-P 小麦 A-F G J 参考文献 Robert Ricker, “Effect of temperature on separation of a wheat protein,” 安捷伦科技出版物5988-6348EN, 0 20 40 60 80 100 www.agilent.com/chem/cn 50° 系统概况 LC系统 四元或二元梯度组件 0 20 40 60 80 100 检测 DAD 色谱柱 条件 ZORBAX 300 SB-C8, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 色谱柱 ZORBAX 300 SB-C8, 150 mm X 4.6 mm, 色谱柱部件号 (安捷伦部件号883995-906) 883995-906 流动相 A: 含0.1% 三氟醋酸的水溶液 B: 含0.1% 三氟醋酸的乙腈溶液 流速 1 mL/min 梯度 0分钟23% B ，120分钟48% B 柱温 50 和70 °C 进样量 15 μL 检测器 DAD, 检测波长210 nm 33 ----------------------- 页面 34----------------------- 蛋白质、多肽、氨基酸 主要分析物 mAU Poroshell 300 SB-C18 1 mL/min 2.1 × 75 mm, 5 μm 200 0-100%B 部件号: 660750-902 牛血清白蛋白消化产物 多肽 BSA ( ) , 12 min 100 基质 标准 0 6 min 参考文献 0 mAU 200 0.208 mL/min Zorbax 300 SB-C18 Robert D. Ricker and Cliff Woodward, “Decreasing Analysis 0-100%B 2.1 × 150 mm, 5 μm 120 min 部件号: 883750-902 Time Using Poroshell 300 SB-C18 in Analysis of a Protein 100 Digest,” 安捷伦科技出版物5988-6081EN, 0 60 min www.agilent.com/chem/cn Aligned 条件 色谱柱 300 SB-C18 (如前所述) 流动相 A = 95% H2O, 5% 乙腈, 0.1% TFA B = 5% H2O, 95% 乙腈, 0.07% TFA 流速 同上 活塞冲程 20 μL 检测 UV: 215 nm 温度 70 °C Agilent 1100 多孔板自动进样器 （使用降低延迟体积设置） 进样量 20 μL (0.22 μg/1 μL) 样品 胰酶消化产物 小时 BSA (15 , 70 pmol) 系统概况 LC系统 二元梯度 检测 DAD 色谱柱 Poroshell 300SB-C18, 2.1 mm X 75 mm, 5 μm ZORBAX 300SB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 色谱柱部件号 660750-902 和883750-902 34 ----------------------- 页面 35----------------------- 蛋白质、多肽、氨基酸 9 主要分析物 mAU 338 nm 3 16 15 17 A 18 10 4 7 8 10 11 12 14 19 21 AAA氨基酸 5 1 2 6 13 20 5 0 基质 mAU 标准 15 262 nm 22 23 B 10 参考文献 5 21 24 0 John W. Henderson, Robert D. Ricker, Brian A. Bidling- 0 2 4 6 8 10 12 min meyer,and Cliff Woodward, “快速、准确、重现性好的HPLC 图1. 用Eclipse-AAA方案对24种氨基酸进行高通量常规分离。柱尺寸为4.6 ×75 mm, 氨基酸分析方法 安捷伦科技出版物 3.5 μm。检测： 氨基酸 氨基酸 ” 5980-1193CHCN, A. 338 nm (OPA ), B. 262 nm (FMOC- ) www.agilent.com/chem/cn 9 mAU 3 16 17 3.5 μm Zorbax Eclipse-AAA 8 2 15 18 21 4 8 1011 12 14 19 系统概况 4 1 567 13 20 0 LC系统 mAU 9 四元或二元梯度组件 8 3 1617 5 μm, Zorbax Eclipse-AAA 15 18 21 检测 4 1 2 4 78 10 11 12 14 1920 13 6 5 FLD/OPA-FMOC 0 色谱柱 0 5 10 15 20 25 min Eclipse-AAA, 4.6 mm X 75 mm 以及4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm; 图2. 用5 μm 和3.5 μm ZORBAX Eclipse-AAA柱对21种氨基酸进行高分离分析。 柱尺寸为 4.6 ×150 mm。检测器： 氨基酸) 3 mm X 150 mm, 3.5 μm; 以及4.6 mm X 150 mm, 5 μm 338 nm (OPA 色谱柱部件号 见应用报告 流动相 流动相A 40 mM Na HPO pH 7.8[5.5 g NaH PO , 2 4 2 4 （ 升水 一水化物）+ 1 ， 用 溶液 调节 至 NaOH (10 N) pH 7.8] 流动相 乙腈 甲醇水 B : : (45:45:10, v/v/v) 通常配制 倍浓缩的贮备液，先不调 。溶液可以保存几周，用时稀释 10 pH 并调节 。所有流动相试剂都应为 级。 pH HPLC 泵的设置 流速 2 mL/min 停止时间 分钟 柱 或 分钟 柱 14 (75 mm ) 26 (150 mm ) 后运行时间 关闭 梯度 75 mm长柱子的梯度 时间(分钟) % B 0 0 1 0 9.8 57 10 100 12 100 12.5 0 14 0 35 ----------------------- 页面 36----------------------- 控制使用的 危险的药物 / 6 主要分析物 ?10 三氯二苯脲 5 氯贝酸 萘普生 药物 吉非贝齐 4 布洛芬 基质 酮洛芬 布洛芬 - d3 双氯芬酸 3 钠盐 水 2 参考文献 双氢克尿塞 依那普利拉 呋塞米 1 Chin-Kai Meng, Stephen L. Werner, and Edward T. Furlong, 阿斯匹林 利用固相萃取和液相色谱 质谱 质谱在正离子模式下检测水 “ / / 中的医药类化合物 安捷伦科技出版物 ” 5989-5319CHCN, 3.2 3.4 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8 5 5.2 5.4 5.6 5.8 6 6.2 6.4 6.6 6.8 7 7.2 www.agilent.com/chem/cn Abundan ce vs. acquisition time (min) 图1. 11种药物的负离子模式TIC 系统概况 LC系统 条件 1200SL 色谱柱 ZORBAX Extend-C-18, RRHT, 2.1 mm X 100 mm, 1.8 μm 检测 柱温: 40 °C MSMS QQQ ESI± 流动相 甲酸水溶液加 缓冲液调 至 A 0.1% , NH OH pH 5.5 4 色谱柱 流动相B 乙腈(ACN) 流速: 0.3 mL/min Extend-C18, 2.1 mm X 100 mm, 1.8 μm 梯度: 时间 %B 色谱柱部件号 0 0 728700-902 15 100 20 100 21.5 0 36 ----------------------- 页面 37----------------------- 控制使用的 危险的药物 / 主要分析物 Intensity x104 4 硝基呋喃类 2 NBA-AMOZ 0 基质 x104 6 NBA-d AMOZ 4 5 家禽 虾 , 2 0 4 参考文献 x10 1.50 1.00 NBA-AOZ Bernhard Wüst, Christian Sauber, and Hans (J.) A. van Rhijn 0.50 0.00 “Quantitation of Nitrofuran Metabolites in Shrimp and Poul- x104 try by LC/MS/MS Using the Agilent LC/MSD Trap XCT,” 1.2 NBA-d AOZ 安捷伦科技出版物5989-0738EN, 0.8 4 0.4 www.agilent.com/chem/cn 0.0 6000 4000 NBA-AHD 系统概况 2000 0 LC系统 x104 二元梯度 4 NBA-SEM 2 检测 0 MSn 离子阱XCT ESI+ 2 4 6 8 10 12 Time [min] 色谱柱 图5. 0.25 μg/kg 阳性虾样品的典型色谱图 ZORBAX XDB-C8, 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 色谱柱部件号 971700-906 LC/MS/MS方法细节 HPLC方法性能 HPLC Agilent 1100 总量RSD 4.3% 流速 0.4 mL/min 总回收率 100% 色谱柱 ZORBAX XDB-C8, 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 流动相 A: 水+ 0.1% 醋酸 B: 乙腈+ 0.1% 醋酸 梯度 0–14 分钟: 10% A - 45% A; 14–16 分钟: 45% A - 90% A 进样 50 μL 中进样500 μL MS 1100 LCMSD XCT 离子阱 电离方式 ESI+ 雾化器压力 45 psi 干燥气流量 12 L/min 干燥气温度 350 °C 锥孔电压 20 V 毛细管出口电压 55 V 离子阱驱动 55 ICC 打开 37 ----------------------- 页面 38----------------------- 控制使用的 危险的药物 / 12000 5.530 - NOR 8000 4000 320 诺氟沙星(IS) 0 12000 + 330 = [M + H] 8000 5.531- NORq1 4000 302 + 302 = [M – H O + H] 0 2 12000 276 = [M – CO2 + H]+ 8000 4000 5.532 - NORq2 276 0 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 9 min 12000 8000 5.484 - NOR 320 4000 0 12000 牛肾空白 8000 302 4000 5.485 - NORq1 0 12000 8000 276 4000 5.482 - NORq2 0 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 9 min 主要分析物 HPLC 氟喹诺酮类 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB-C8, 基质 150 mm X 4.6 mm, 5 μm (部件号993967-906) 牛肾 溶剂A 含0.1% 甲酸的水溶液 溶剂B 含0.1% 甲酸的乙腈溶液 参考文献 梯度 t0 = 20% B 高效液相色谱电喷雾质谱 t1 = 20% B Ralph Hindle and Chin-Kai Meng, “ - t8 = 90% B 分析牛肾组织中的氟喹诺酮 安捷伦科技出版物 ” 5989-0596EN, t15 = 90% B www.agilent.com/chem/cn 后运行时间= 2.0分钟 流速 0.4 mL/min 进样量 50 μL 柱温 30 °C 系统概况 MSD LC系统 离子源 电喷雾电离(ESI) (正离子模式) 离子驻留时间 14个离子各40 ms 二元梯度 碰撞诱导解离电压 对不同离子各不相同 检测 干燥气流量 12 L/min MSD ESI+ 雾化器压力 30 psi 色谱柱 干燥气温度 350 °C 毛细管电压 4000 V ZORBAX XDB-C8, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 色谱柱部件号 993967-902 38 ----------------------- 页面 39----------------------- 控制使用的 危险的药物 / 主要分析物 CAP: EIC 176, 194, 249, 257 m/z (2.5 pg/μL) 氯霉素(CAP) 1000 基质 0 CAP-d5: EIC 180, 199, 254, 262 2000 (5 pg/μL) 虾 蜂蜜 , 1000 参考文献 0 4 5 Time (min) G. Vanhoenacker, F. Davis, P. Sandra, “Detection, Confirma- 2.5 pg/μL CAP 257 tion, and Quantitation of Chloramphenicol in Honey and 194 5 pg/μL d5-CAP6 Shrimp at Regulatory Levels Using Quadrupole and Ion Trap 262 LC/MS,” 安捷伦科技出版物5988-9920EN, 176 249 www.agilent.com/chem/cn 160 240 0.2 pg/μL CAP 257 199 254 (LOD) 180 系统概况 160 240 320 m/z 176 194 LC系统 249 二元梯度 160 240 320 m/z 检测 及 离子阱 – 图2. 用LC/MSD离子阱MS/MS图谱分析标准溶液 （含2.5 pg/mL CAP和5 pg/mL MSD MSn ESI CAP-d5 (IS)），以及含0.2 pg/mL CAP标准溶液的MS/MS图谱分析 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB-C18, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 色谱柱部件号 993967-902 60000 TIC 30000 15000 EIC 257, 321, 323 m/z (CAP) Q U A R U 7500 P O L E 12000 EIC 262, 326, 328 m/z (CAP-d5) 6000 0 4 5 6 7 Time (min) 15000 EIC 176, 194, 249, 257 m/z (CAP) T R 0 A P 15000 EIC 180, 199, 254, 262 m/z (CAP-d5) 0 4 5 6 7 Time (min) 图4. 含1 ppb CAP-d5空白蜂蜜样品的分析 条件 流动相 10 mM 醋酸铵水溶液 （溶剂A） 甲醇 乙腈 溶剂 / 1/9 ( B) 39 ----------------------- 页面 40----------------------- 控制使用的 危险药物 / 主要分析物 1 SMr 6 SMMX 2 PYM 7 DFZ 磺胺类药物 Absorbance 2 3 TCP 8 SDMX [mAU] 4 SDD 9 SQX 5 FZD 10 OXA 基质 20 at 224 nm 3 9 肉类 10 1 4 5 6 7 8 10 0 参考文献 0 5 10 15 20 25 30 35 Time (min) Absorbance Hiroki Kumagai and Adebayo Onigbinde, “用HPLC分析肉类 [mAU] 食品中的残留合成抗生素 安捷伦科技出版物 20 ” 5988-7135EN, at 360 nm DFZ www.agilent.com/chem/cn 10 FZD 0 0 5 10 15 20 25 30 35 Time (min) 图 1. 标准溶液色谱图，分析物各含2 μg/mL 系统概况 Absorbance [mAU] LC系统 4 at 224 nm 四元或二元梯度组件 2 SDD 检测 0 DAD 0 5 10 15 20 25 30 35 Time (min) 色谱柱 Absorbance [mAU] RP-18 Purospher, 250 mm X 4 mm, 5 μm 4 at 360 nm 色谱柱部件号 2 79925PU-584 0 0 5 10 15 20 25 30 35 Time (min) 图2. 牛肉提取物色谱图 条件 色谱柱 RP-18 Purospher, 250 mm X 4 mm, 5 μm (安捷伦部件号79925PU-584) 流动相 A: 0.7% 磷酸 B: 乙腈 梯度 0分钟5% B 10分钟65% B 40分钟65% B 45分钟65% B 后运行时间 7 分钟 流速 1 mL/min 柱温 40 °C 进样量 20 μL 检测器 DAD 检测波长338/10 nm, 264/8 nm和 360/8, 参比波长关闭 40 ----------------------- 页面 41----------------------- 控制使用的 危险的药物 / 主要分析物 1 磺胺 3 磺胺嘧啶 5 磺胺甲基嘧啶 7 磺胺对甲氧嘧啶 2 乙酰磺胺 4 磺胺吡啶 6 磺胺二甲嘧啶钠 磺胺药物 2 5 6 7 基质 4 1 4 标准 ] U 3 A 3 m [ 参考文献 e 2 100 pg c n a b 1 r 采用带有二极管阵列 o 10 pg Rainer Schuster and Christine Miller, “ s b 0 检测器和质谱检测器的毛细液相色谱分析低 范围的磺胺药 A pg 物 安捷伦科技出版物 -1 ” 5980-2499EN, 0 2 4 6 8 10 [min] www.agilent.com/chem/cn 图 用二极管阵列分析 种磺胺混合物 （进样量 ，绝对量分别为 和 ） 1. 7 100 nL 10 pg 100 pg 系统概况 B LC系统 2500 乙酰磺胺 m/z 215.1 CapLC 1 磺胺胍 5 磺胺吡啶 2200 检测 2 磺胺 6 磺胺甲基嘧啶 2200 磺胺甲基嘧啶 3 乙酰磺胺 7 磺胺二甲嘧啶钠 m/z 279.1 DAD MSD ESI+ A 4 磺胺嘧啶 7 磺胺对甲氧嘧啶 7 色谱柱 1 600 5 1600 磺胺对甲氧嘧啶 8 m/z 281.1 ZORBAX SB-C18, 0.5 mm X 150 mm, 3.5 μm 5000 6 色谱柱部件号 4000 400 2 4 6 8 min e 2 5064-8262 c 3000 n a d 3 n 4 u 2000 b A 10 pg 1000 1 pg 0 2 4 6 8 10 min 图 用 和 分析 和 标准混合物—— （）的总离子流图和 2. MSD SIM 10 pg 1 pg SIM A （）的提取离子流图 SIM B 条件 流动相 A = 0.1 % 甲酸水溶液 B = 0.1 % 甲酸乙腈溶液 41 ----------------------- 页面 42----------------------- 控制使用的 危险的其它物质 / 主要分析物 m/z 127 1600 HMF羟甲基糠醛 1400 1200 基质 O OH 1000 O 面包、谷类食品、酸奶 800 HMF 600 参考文献 400 200 用液相色谱质谱法 2.5 5 7.5 10 12.5 min Vural Gokmen, Hamide Z. Senyuva, “ - （ ）快速测定食品中的羟甲基糠醛 安捷伦科技 LC-MS ” Agilent 图3. 面包样品的提取离子色谱图 (HMF 浓度为17.5 μg/g) 出版物5989-5403CHCN, www.agilent.com/chem/cn 7000 m/z 127 6000 O OH 5000 O 4000 系统概况 3000 HMF LC系统 2000 1000 二元梯度G1312A或G1312B 检测 2.5 5 7.5 10 12.5 min MSD APCI+ 图4. 果味酸奶样品的提取离子色谱图 (HMF浓度为0.2 μg/g) 色谱柱 Bonus-RP, 2.1 mm X 100 mm, 3.5 μm 色谱柱部件号 条件 861768-901 LC/MS 流速 0.2 mL/min 梯度 ZORBAX Bonus RP, 100 mm X 2.1 mm, 3.5 μm 流动相 0.01 mM 醋酸于0.2% 甲酸水溶液中 进样 20 μL 中进样1000 μL MS 条件 电离模式 APCI+ 雾化器压力 60 psi 干燥气流量 4 L/min 干燥气温度 325 °C 雾化器温度 425 °C 锥孔 20 V 毛细管电压 4 kV 碰撞诱导解离电压 55 eV 驻留时间 439 ms 42 ----------------------- 页面 43----------------------- 控制使用的 危险的其它物质 / 主要分析物 样品提取 丙烯酰胺 分析泵 第二个泵 1100 自动进样器 1100 柱温箱 基质 1 1 分析柱 2 2 LC/MSD 饮用水 6 6 TOF 5 5 3 3 4 4 参考文献 废液 提取预柱 Sophie Men, Johanne Beausse, Jean-Francois Garnier, "Determination of Acrylamide in Raw and Drinking Waters,” 安捷伦科技出版物5988-2884EN, 丙烯酰胺 1 μg/L -丙烯酰胺 (未知) 72.0 - 72.0 amu amu -丙烯酰胺1 μg wiff 面积: 1.92e+004 峰高: 4.09e+003 cps RT: 1.93分钟 6000 www.agilent.com/chem/cn 1.93 5000 s 4000 p c , y t i 3000 s 系统概况 n e t n I 2000 2.38 LC系统 0.41 1.071.42 3.50 4.24 4.99 两个双位六通阀，用于自动固相萃取 1000 检测 0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 MS TOF ESI+ Time, min 色谱柱 丙烯酰胺 1 μg/L -丙烯酰胺d3 (未知) 75.0 - 75.0 amu amu -丙烯酰胺 1 μg wiff ZORBAX SB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 面积: 2.21e+002 峰高: 1.12e+002 cps RT: 1.95 min 6000 色谱柱部件号 883700-922 5000 s 4000 p c , y t i 3000 s n e t n I 2000 1000 2.18 3.18 0.29 1.02 1.46 1.95 2.54 4.06 4.18 4.89 5.31 0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, min 图5. 1 μg/g丙烯酰胺的提取离子流图 条件 洗脱溶剂 水 含 甲酸 A: 97% HPLC ( 0.01% ) 乙腈 含 甲酸 B: 3% ( 0.01% ) 43 ----------------------- 页面 44----------------------- 控制使用的 危险的其它物质 / 主要分析物 9000 Cr(III) 0.1 μg/L 铬形态 8000 s t 基质 n 7000 Cr(VI) 0.1 μg/L u o c / 水样 e 6000 c n a d n 5000 u 参考文献 b A 4000 Tetsushi Sakai, Ed McCurdy, and Steve Wilbur, “离子色谱 （） 分析天然水中铬 安捷伦科技出版物 3000 IC ICP-MS ” 5989-2481CHCN, www.agilent.com/chem/cn 2000 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 Retention Time / min 图2. 浓度各为0.1 μg/L的Cr(III)和Cr(VI)的分离与检测 色谱柱 (G3268A) Metrohm 阀1 ICP-MS 14000 水 B + 1 μg/L 各 Cr(III),Cr(VI) 818 IC 泵 ISIS 雾化器 13000 Cr(III): 1.10 μg/L Cr(VI): 1.27 μg/L 流动相 12000 0.05~1.0 mL 11000 s 10000 排放 t n u o 9000 C / 泵1 e c 8000 ISIS n a d 7000 n 样品 集成样品导入系统 u 原水 B b (ISIS) A 6000 Cr(III): 0.05 μg/L 5000 自动进样器 Cr(VI): 0.24 μg/L (ASX500) 4000 3000 图1. 用于Cr形态分析的IC-ICP-MS配置 2000 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 RT/min 图 加标与未加标矿泉水 中的主要元素组成 和色谱图 5. A (mg/L) 系统概况 条件 LC系统 Cr 柱 安捷伦部件号G3268A, Metrohm 818泵、Agilent 7500 ISIS进样器 30 mm X 4.6-mm id 流动相 5 mM EDTA (Na ), 用NaOH调节pH 检测 2 流速 1.2 mL/min IC-ICPMS 柱温 室温 色谱柱 进样量 50~500 μL Agilent Cr, 4.6 mm X 30 mm, 5 μm 样品制备 色谱柱部件号 反应温度 40 °C 加热时间 3 h G3268A 浓度 用 调节 。 EDTA 5~15 mM, NaOH pH 44 ----------------------- 页面 45----------------------- 控制使用的 危险的其它物质 / 主要分析物 MSD1 TIC, MS File (ICDATA~1\ICBLK1D\IC000045.D) API-ES, Neg, SIM, Frag: 140, "neg sim" MSD1 TIC, MS File (ICDATA~1\ICBLK1D\IC000046.D) API-ES, Neg, SIM, Frag: 140, "neg sim" MSD1 TIC, MS File (ICDATA~1\ICBLK1D\IC000047.D) API-ES, Neg, SIM, Frag: 140, "neg sim" 高氯酸盐 MSD1 TIC, MS File (ICDATA~1\ICBLK1D\IC000048.D) API-ES, Neg, SIM, Frag: 140, "neg sim" 基质 No interferents _ _ _ 18000 200 ppm Cl , CO3 2, SO4 2 _ _ _ 水、蔬菜 500 ppm Cl , CO3 2, SO4 2 _ _ _ 16000 2 2 1000 ppm Cl , CO3 , SO4 参考文献 14000 12000 离子色谱 质谱 Johnson Mathew, Jay Gandhi, Joe Hedrick, “ / 10000 联用分析高氯酸盐 安捷伦科技出版物 ” 5989-0816CHCN, www.agilent.com/chem/cn 8000 2 4 6 8 10 12 14 16 min 图5. 合成基质与添加了1 ppb高氯酸盐的基质图谱叠加 表1. 工作参数 Metrohm Advanced IC 系统概况 进样定量管体积 100 μL LC系统 色谱柱 MetroSep ASUPP-5 (4 mm X 100 mm) Metrohm IC 流动相 3/7 v/v 甲醇/30 mm NaOH, 水 检测 流速 0.8 mL/min – Agilent 1100 MSD MSD ESI 色谱柱 调谐模式 负离子模式“自动调谐” V 1400 V 见本页上有关metrohm柱的介绍 cap HPLC方法性能 干燥气流量和温度 9 L/min @ 320 °C 总量RSD 4.3% 雾化器压力 20 psig 总回收率 101.5% 碰撞诱导解离电压 140 V 驻留时间m/z 99 1 s 驻留时间m/z 101 1 s 表2. Metrohm-Peak 离子色谱仪参数和设置 硬件 包括 自动进样器、 界面与 Metrohm Advanced IC Metrohm 788 830 软件、 抑制器组件、 检测器、 ICNet 2.3 833 819 Advanced IC 820 IC 分离中心、818 IC 系列双柱塞泵 设置 色谱柱 Metrohm ASUPP- (4 mm X 100 mm) 部件号6.1006.510 洗脱液 3/7 v/v 甲醇/30 mM NaOH, 水 再生溶液 5/95 v/v 甲醇/60 mM HNO3 清洗溶液 5/95 v/v 甲醇/H O 2 流速 0.8 mL/min 抑制器再生和清洗流速 0.5 mL/min 通过MSD 串行接口和820 IC分离中心的事件连接，同步启动MSD 和IC 45 ----------------------- 页面 46----------------------- 控制使用的 危险的其它物质 / 主要分析物 14000 AsB 三甲铵基砷 12000 基质 ) 10000 s t n u 8000 o c ( e DMA 鱼类 c n As(III) a d n 6000 u b A 参考文献 4000 MMAA 2000 Raimund Wahlen, “Fast and accurate determination of arsenobetaine (AsB) in fish tissue using HPLC-ICP-MS,” 0 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 安捷伦科技出版物5988-9893EN, Time (min) www.agilent.com/chem/cn 图1. 色谱图A: 2.2-mM NH HCO 2.5-mM酒石酸，1%甲醇, Hamilton PRP X-100 4 3 柱 标准浓度 同 . ~ 5 ng/g As 系统概况 条件 LC系统 色谱柱 Hamilton PRP X-100 等度G1310A 流动相 A: 2.2-mM NH HCO , 4 3 B: 2.5-mM酒石酸, 1% 甲醇 检测 流速 1 mL/min ICP-MS 柱温 40 °C 色谱柱 进样量 50 μL 见右侧的Hamilton说明 梯度 0分钟20% A ， 30分钟100% A 检测器 HPLC-ICP-MS RF功率 1430–1550 RF匹配1.89–1.92 V 取样深度4.0–4.8 mm 载气流量0.89–0.93 L/min 尾吹气流量0.10–0.14 L/min 可选气体氧@ 5% 雾化室温度0 °C 铂锥 监测的同位素75As, 103Rh, 77Se, 53Cr 进样器直径 2.4 mm 雾化器 100 L/min PFA 2 接口泵 确证 MS图谱信息和保留时间 46 ----------------------- 页面 47----------------------- 控制使用的 危险的天然毒素 / 主要分析物 岗田酸(OA) 正离子化 DSP 海藻毒素 基质 贝类 参考文献 Norbert Helle, Sebastian Lippemeier, and Jürgen Wendt, “用LC/MS 系统以分析模式和半制备模式鉴定和分离DSP-毒 素 安捷伦科技出版物 ” 5989-2912CHCN, www.agilent.com/chem/cn 岗田酸(OA) 系统概况 负离子化 LC系统 四元梯度 检测 MSD ESI± 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 3 mm X 150 mm, 5 μm; 17.0 17.2 17.4 17.6 9.4 mm X 50 mm, 5 μm 半制备 色谱柱部件号 100 Max: 611673 751.4 883975-302 and 846975-202 80 769.4 60 827.4 岗田酸 (OA) 752.4 40 正离子化 770.4 828.4 20 733.4 753.4 771.4 829.4 787.4 0 650 675 700 725 750 775 800 825 850 m/z 30 Max: 177930 25 20 15 岗田酸 (OA) 804.4 负离子化 10 5 805.4 0 650 675 700 725 750 775 800 825 850 m/z 图4. OA 的LC/MS分析 续 47 ----------------------- 页面 48----------------------- LC/MS 方法细节– 分析 LC 条件 仪器 Agilent 1100 HPLC (四元泵) 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 3.0 mm X 150 mm, 5 μm 流动相 水 甲酸、 A (0.1% ) 1467 μg/kg B 甲醇 岗田酸 梯度 0分钟时20% B、 5分钟时20% B 、 20分钟时80% B 停止时间 28分钟 mV Post time 4 分钟 流速 0.6 mL/min 进样量 10 μL HPLC/荧光 MS 条件 仪器 Agilent LC/MSD 离子源 正离子 负离子切换 / ESI 干燥气流量 12 L/min 雾化器 60 psig 干燥气温度 350 °C Vcap 3000 V (正离子和负离子) 方法细节 半制备 LC/MS – LC 条件 0 10 20 30 40 min 仪器1 Agilent 1100 HPLC (四元泵) 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 9.4 mm X 50 mm, 5 μm 1467 μg/kg 流动相 A 水(0.1% 甲酸) 岗田酸 B 甲醇 梯度 0分钟时20% B、 5分钟时20% B 、 20分钟时80% B 停止时间 28分钟 Post time 4 分钟 流速 7.0 mL/min 进样量 100 μL (250 μL 采用多次吸取模式) 仪器 等度泵 用于流量补偿） 2 Agilent 1100 HPLC ( ) （ 流速 0.8 mL/min (50% H O + 50% MeOH + 2 0.1% 甲酸) mV 主动分流器 分流比271:1 MS 条件 仪器 Agilent LC/MSD 离子源 ESI- 干燥气流量 12 L/min 喷雾器 60 psig 干燥气温度 350 °C Vcap 3000 V (正离子) MSD 馏分收集设置 LC-MS, API + 模式 使用方法目标质量；加合： – FC (M–H) 2 6 10 14 18 min 图5. 贝类中海藻毒素的对比分析 48 ----------------------- 页面 49----------------------- 控制使用的 危险的天然毒素 / 主要分析物 Abundance 烟曲霉素 B1 烟曲霉素 B3 烟曲霉素 B2 7.690 3.281 毒枝菌素、烟曲霉素 800000 6.274 基质 400000 谷物 1.251 参考文献 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min Friedrich Mandel, “液质联用方法用于烟曲霉素的分析” Retention Time (min) 安捷伦科技出版物5968-2124CHCN, 图3. 25 ng烟曲霉素同系物的色谱分离 www.agilent.com/chem/cn 722.5 200000 烟曲霉素 B1 100000 0 系统概况 200000 烟曲霉素 B3 706.5 100000 LC系统 0 烟曲霉素 B2 二元梯度 200000 706.5 100000 检测 0 200 300 400 500 600 700 800 MSD ESI+ m/z 色谱柱 图2. 同系物的质谱图 ZORBAX XDB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 色谱柱部件号 993700-902 色谱条件 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB, C18, 2.1 mm X 150, 5 μm 流速 A = 5 mM 醋酸铵水溶液 B =乙腈 梯度 33% B起始， 8分钟时60% B ， 9分钟时33% B 流速 250 μL/min 进样量 5 μl 柱温 40 °C 二极管阵列检测器 信号220, 4 nm; 参比波长及带宽550,100 nm MS 条件 离子源 ESI 离子模式 正离子 V 4000 V cap 喷雾器 30 psig 干燥气流量 10 l/min 干燥气温度 350 °C 扫描范围 120-820 amu 步长 0.1 峰宽 0.15 分钟 时间过滤器 打开 碰撞诱导解离电压 230 V (100-680) 100 V (680-800) 49 ----------------------- 页面 50----------------------- 控制使用的 危险的天然毒素 / 方法： 主要分析物 1. 样品制备和衍生 黄曲霉素 用有SPE新功能的Gerstel MPS-3 自动进样器对黄曲霉素进行在线净化和衍生。 基质 连续自动执行两个用户设置的检测器程序。 各种食品 参考文献 净化 将样品管移至 单元 MOVE - spe Jürgen Wendt, etc. “Improving the MS Detection of Alfatox- 将亲和小柱移至 单元 MOVE - spe ins using a LC/MS System with Automated Online Solid Phase Extraction and Derivatization,” 安捷伦科技出版物 ADD - 将设定体积加至小柱 ASM514, Poster, www.agilent.com/chem/cn WASH - 用20 ml 水冲洗小柱 将 单元从废液处移至样品管上 SHIFT - spe ADD - 用甲醇洗脱样品 O O 衍生化 H C 3 Br O MOVE - 将样品管移至震荡盘 （搅拌盘） O 加入衍生化溶液 溴 ADD - ( /CHCl3) O 混合 分钟 衍生 MIX - 2 ( ) CH O 3 MOVE - 将样品管移至进样盘上 O INJECT O O 图3. 自动化SPE净化和衍生程序 H C Br 3 O O 2. LC/MS 方法 O Agilent 1100 LC/MSD连接自动进样器，系统包括二元泵、柱温箱、二极管 阵列检测器和 单级四极杆）。 采用电喷雾正离子模式。色 LC/MSD （ LC/MSD O 谱分离在 上进行， 流 Phenomenex Max RP (250*2.1 mm, 5 μm) 0.3 mL/min CH 速，梯度洗脱 （洗脱液 ： 甲酸，水洗脱液 ：乙腈，水）。用 3 A 0.1% B Agilent O O 化学工作站(Rev.A10.03)进行全系统控制 （包括自动进样器）和数据处理。 图4. 单溴化黄曲霉素 B1/G2 G1 系统概况 B2 LC系统 Agilent/Gerstel 在线SPE B1 G1 检测 brom brom MSD ESI+ 色谱柱 Phenomenex MAX RP, 2.1 mm X 250 mm, 5 μm 色谱柱部件号 2 4 6 8 10 12 14 推荐ZORBAX SB-C18, 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm, 830990-902 图6. 衍生前 （上）后 （下）的黄曲霉素TIC 50 ----------------------- 页面 51----------------------- 控制使用的 危险的杀虫剂 除草剂 / / x107 主要分析物 (A) 6 29,30 1.2 44 种杀虫剂 10 12 18 19, 20 7,8 0.8 24 31 基质 1 4 9 15,16 27, 28 33 13 21 26 0.4 2 14 22 25 蔬菜、水果 5 3 17 23 32 11 参考文献 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 Abundance versus acquisition time (min) x106 6 Masahiko Takino and Toshitsugu Tanaka, “用LC/MS/MS测定 6.5 (B) 食物中的 种杀虫剂含量 安捷伦科技出版物 9 10 12 29, 30 44 ” 5989-5459CHCN, 24 31 4.5 7, 8 19, 20 www.agilent.com/chem/cn 14 18 21 2.5 2 5 11 13 33 1 15, 16 22 3 4 25 23 27, 28 32 17 26 0.5 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 Abundance versus acquisition time (min) 系统概况 图 种杀虫剂标准品的全扫描模式 （）和产物离子扫描模式 （） 1. 1 μg/mL 33 A B TIC LC系统 二元梯度 检测 MSMS QQQ ESI+ LC 条件 仪器 Agilent 1100 HPLC 色谱柱 色谱柱 ZORBAX Extend C18, Extend-C18, 2.1 mm X 100 mm, 1.8 um 100 mm X 2.1 mm, 1.8 μm 色谱柱部件号 (部件号728700-902) 柱温 40 °C 728700-902 流动相 A = 0.1% 甲酸+ 5 mM 甲酸铵水溶液 B = 乙腈 梯度 分钟 ， 分钟 : 0 10% B 30 80% B 流速 0.2 mL/min 进样量 5 μL MS 条件 仪器 Agilent 6410 QQQ 离子源 ESI+ 干燥气流量 10 L/min 雾化器 50 psig 干燥气温度 350 °C V 4000 V cap 扫描 m/z 100到550 裂解器 电压100 V 多反应监测离子 见表 和表 1 2 碰撞能量 见表 和表 1 2 51 ----------------------- 页面 52----------------------- 控制使用的 危险的杀虫剂 除草剂 / / mAU 主要分析物 120 n e b m a r o l m h 100 a C r - o 酸性除草剂 l 6 c 3 i 4 P . - 4 1 9 80 7 6 . 2 1 基质 n 60 o n z e a f a r b t o n u m e l p f a B D- o i c - r c i 4, p P A D 5 r 水 40 - 9 2- o T- - 8 l 5 5 . 0 h 4, 8 4 8 8 c , 7 8. 1 4 i 2 6. . D 7 - 4 1 9 - 5 2 1 4 9 20 0 0 3 8 1. 3. 9 0 3 3 1 2 0 3. 5 2 2 6. 参考文献 3 6. 0. 9 1 7 2 2 1 0 Michael Woodman, “高分离度快速液相色谱和在线痕量富集方 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 min 法用于除草剂的快速分析 安捷伦科技出版物 ” 5989-5176CHCN, 图2. 用4.6 mm ×250 mm, 5-μm ZORBAX SB-C1柱梯度分离除草剂 www.agilent.com/chem/cn 条件 色谱柱 EPA 方法555 使用ZORBAX SB-C18柱和快速 系统概况 DAD检测器 ZORBAX SB-C18, 4.6 mm X 250 mm, 5 μm LC系统 柱温 25 °C 梯度 25 mM H PO , 30分钟时乙腈从10%到达90% 自动 带双二元泵和 通阀 3 4 SPE/1200SL 6 梯度斜率 乙腈柱体积 7.8% / 检测 分析流速 1 mL/min DAD A组化合物 100 μg/mL的1 μL 总分析时间 60分钟 色谱柱 检测 流通池 过滤器 UV 230 nm, 10-mm 13-μL , ZORBAX SB-C18, 5, 3.5, 和1.8 μm 秒 默认 2 ( ) 色谱柱部件号 见应用报告 mAU 2 2 3 7 5 6 . . 700 1 1 600 500 8 4 0 400 2. 3 1 2 6 5 7 1. 8 2. 2 6 3. 7 0 2 7 2 5. 300 2. 2 200 6 2 100 3 6. 0 5 4 2 3 2 1 6. 0 8. 0 2 1 1 2 . 1. 3. 3 1 2 0 1.25 1.5 1.75 2 2.25 2.5 2.75 3 3.25 min 图5. 用2.1 ×80 mm, 1.8 μm ZORBAX SB-C18柱高速梯度分离除草剂 条件 方法 使用 柱和快速 检测器 EPA 555 ZORBAX SB-C18 DAD ZORBAX SB-C18, 2.1 mm X 80 mm, 3.5 μm 柱温 50 °C 梯度 乙腈 分钟内， 25-mM H PO / , 2.7 3 4 乙腈从10% 到90% 乙腈柱体积 7.8% / 分析流速 0.72 mL/min 检测 UV 230 nm, 3-mm 2-μL 流通池, 过滤器 秒 0.2 放置长时间的样品 1 μL 100 μg/mL 总分析时间 6 分钟 待续 52 ----------------------- 页面 53----------------------- 实验条件 系统 Agilent 1200 SL 系列高分离度快速液相色谱系统包括： G1379B微量脱气机 G1312B SL型二元泵 G1312A二元泵，包括溶剂选择阀，或 G1354A 四元泵 自动进样器 型和 G1367C HiP SL , G2258A 双定量管制备自动进样器5 mL 型柱温箱包括 或 口 G1316B SL 6 10 2位切换阀 二极管阵列检测器 型流通池见各色谱图 G1315C UV/Vis (DAD) SL , 化学工作站 位 版 32 B.02.01 色谱柱 Agilent ZORBAX SB-C18, 4.6 X 250 mm, 5 μm Agilent ZORBAX SB-C18, 3.0 X 150 mm, 3.5 μm Agilent ZORBAX SB-C18, 2.1 X 80 mm, 1.8 μm Agilent ZORBAX SB-Aq, 4.6 X 12.5 mm, 5 μm 流动相条件 有机溶剂 乙腈 水相溶剂 25 mM磷酸，溶于Milli-Q水 梯度条件 梯度斜率 每个柱体积 或 ，如图所示。流速和时间见 7.8 2.3% 各色谱图。 样品 组氯代苯氧酸除草剂毒莠定、草灭平、麦草畏、苯达松、 滴 EPA 555 A ( 2, 4- 丙酸和2,4,5-TP, 三氟羧草醚), 100 μg/mL溶于甲醇，或用25 mm磷酸酸化的 水稀释成20 ng/L (20 ppb)。 53 ----------------------- 页面 54----------------------- 控制使用的 危险的杀虫剂 除草剂 / / 主要分析物 3.9e7 17.9 采后杀菌剂 3.6e7 抑霉唑 基质 3.2e7 2.8e7 柑橘 s 2.4e7 p c , y t 参考文献 i 2.0e7 s n 16.7 e t n 7.6 I 1.6e7 E. Michael Thurman, Imma Ferrer, Michael Woodman, and 噻菌灵 用液相色谱 飞行时间质谱和液相色谱 1.2e7 21.0 21.5 Jerry Zweigenbaum, “ / / 抑霉唑 26.0 24.8 离子阱质谱分析柑橘和橙汁中采后杀菌剂及其代谢物 安捷伦 8.0e6 降解产物 20.4 25.4 26.4 ” 科技出版物5989-2728CHCN, www.agilent.com/chem/cn 4.0e6 2.1 2.4 2.7 14.9 18.2 22.723.9 0.0 22 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 Time, min 图 橘子皮的 总离子色谱图 ，注意色谱图中 个大峰是抑霉唑和噻 2. LC/MSD TOF (TIC) 2 菌灵。 系统概况 LC系统 二元梯度 LC/TOF MS方法 泵 二元泵进样量 使用 检测 LC Agilent 1100 , 50 μL 离子阱均采用 + Agilent 1100 ALS 标准自动进样器 MS TOF, MSn , ESI 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB-C8, 色谱柱 4.6 mm X 150 mm, 5 μm, ZORBAX XDB-C8, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 产品号993967-906 流动相 A = 乙腈和B = 0.1% 甲酸水溶液 色谱柱部件号 梯度 分钟 等度 分钟线性梯度至 5 10% A , 30 100% 993967-906 A ，流速0.6 mL/min 仪器 Agilent LC/MSD TOF 飞行时间质谱，带双电 喷雾离子源， ，毛细管 ESI+ 4000 V 雾化器 40 psig 干燥气 9 L/min, 300 °C 碰撞诱导解离电压 190 V, 锥孔60 V, Oct DC1 37.5 V, OCT RF V 250 V 参考质量 m/z 121.0509 和922.0098 分辨率 9500±500 at m/z 922.0098 质量范围 50–1000 m/z 流速 参考 雾化器 在运行期间保持恒流 A 2 54 ----------------------- 页面 55----------------------- 控制使用的 危险的杀虫剂 除草剂 / / 主要分析物 2.4 29.0 1.8e7 烟酰氯类杀虫剂 3.6 1.6e7 基质 1.4e7 s 24.1 蔬菜、水果 p 1.2e7 啶虫脒 c , 30.3 y t 28.6 31.0 i 吡虫啉 噻虫啉 27.1 s 1.0e7 25.2 29.4 n 20.9 e 12.8 参考文献 t 21.8 n I 8.0e6 11.0 14.8 19.1 23.5 26.0 2.1 8.3 10.2 18.0 20.5 22.5 Imma Ferrer, E. Michael Thurman, Agilent Contact: 6.0e6 6.8 9.1 19.5 5.1 6.0 7.4 9.8 14.5 液相色谱 飞行时间质谱和液相色谱 离 Jerry Zweigenbaum, “ / / 4.0e6 子阱质谱测定色拉蔬菜中的烟酰氯类杀虫剂 安捷伦科技出版 ” 2.0e6 物5989-1842CHCN, www.agilent.com/chem/cn 0.0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 Time, min 啶虫脒 1.6e6 噻虫啉 [M+H]+ = m/z 223.0745 1.4e6 啶虫脒 m/z 223.0749 实测 s p 1.2e6 c N , Cl y t CH i 1.0e6 3 s n e t 8.0e5 n NH N I 吡虫啉 6.0e5 N 4.0e5 CH 3 2.0e5 理论中性丢失97.0640 u 0.0 CH 3 测定中性丢失97.0644 u 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 CH NH N Time, min N 图3. 强化番茄基质中0.5 mg/kg 三种烟酰氯类杀虫剂的LC/MSD TOF 分析，总离子 流图和提取离子流图分别见上图和下图 Cl N CH3 m/z 126.0105 理论 126.0105 实测 Agilent LC/MSD TOF LC泵 Agilent 1100 二元泵 Cl N 自动进样器 Agilent 1100 标准自动进样器 进样量 50 μL 图5a. 啶虫脒的结构和用LC/MSD离子阱和LC/MS TOF测定的裂解途径。用LC/MSD TOF 只看见一个裂解离子 m/z 126离子 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB C-8 4.6 mm X 150 mm X 5 μm 部件号993967-906 流动相 A: 乙腈 B: 0.1% 甲酸水溶液 系统概况 梯度 30分钟内15% 到100% A 以流速 （ 0.6 mL/min） LC系统 二元梯度 检测 MS TOF, MSn离子阱，均采用ESI+ 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB-C8, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 色谱柱部件号 993967-906 55 ----------------------- 页面 56----------------------- 控制使用的 危险的杀虫剂 除草剂 / / 主要分析物 通过柱箱 通阀和多孔板 通自动进样器阀的流路见图 。 苯基脲类 三嗪除草剂 10 6 1 , 基质 右热交换器 水 分析柱 4 3 2 检测器 参考文献 5 1 柱箱 左热交换器 6 10 Neil Cullum and Pete Stone, “采用LC/MS 大气压电喷雾离子 7 8 9 源 （ ）选择离子和液体样品直接大体积进样技术检测 API-ESI 饮用水和地下水中的苯基脲类和三嗪类除草剂” 安捷伦科技出 预柱 版物5989-0813EN www.agilent.com/chem/cn 废液 泵 1 流量测量头 泵 2 2 1 系统概况 3 6 自动进样器阀 LC系统 4 5 双二元泵带6通阀，用于自动SPE 废液 针座 + 400 μL定量管 检测 图1. 流路示意图 MSD APCI± 色谱柱 HPLC 条件 ZORBAX Eclipse XDB-C8, 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB-C8 色谱柱部件号 50 mm X 2.1 mm, 3.5 μm @ 40 °C 流速0.5 mL/min 971700-906 预柱 ZORBAX SB C18 快速分离色谱柱 30 mm X 2.1 mm, 3.5 μm @ 20 °C 进样量 500 μL 流动相 A = 含0.001% 甲酸的水溶液 B = 甲醇 泵程序 泵 1 (分析柱) 时间 流动相 流动相 流速 (min) A B (mL/min) 起始 90 10 0.5 4.5 90 0 0.5 17.5 30 70 0.5 17.6 90 10 0.5 22.0 90 10 0.5 泵 2 (预柱) 时间 流动相 流动相 流速 (min) A B (mL/min) 起始 90 10 0.5 5.0 90 10 0.5 5.1 90 10 0.1 18.0 90 10 0.1 18.1 90 10 0.5 柱切换阀 时间 阀位 温度 （左）温度 （右） (min) (°C) (°C) 起始 1 20.0 40.0 3.0 2 20.0 40.0 20.0 1 20.0 40.0 待续 56 ----------------------- 页面 57----------------------- 结果 MSD1 242, EIC=241.7:242.7 (VAL3_4\PT3_4024.D) API-ES, Pos, SIM, Frag: 70 (TT) 3 图 、 和 分别显示了添加了浓度为 莠去津、异 8 1 2 3 4 0.1 μg/L 14000 9 8. 5. 6 丙隆和敌草隆自来水的提取离子流图。图 还显示了添加了 6 1 5 1 0.01 μg/L (柱上5 pg) 扑草净和去草净自来水的提取离子 12000 去草净 流图。 10000 扑草净 8000 MSD1 216, EIC=215.7:216.7 (VAL3_4\PT3_4026.D) API-ES, Pos, SIM, Frag: 70 (TT) 6000 4000 40000 5 1 1 . 4 1 2000 35000 莠去津 0 30000 14 15 16 17 18 19 20 21 Minute 25000 图3. 添加0.01 μg/L扑草净和去草净的自来水 20000 15000 用 批样品对方法进行确证。标准制备成三个浓度水平： 11 10000 、 和 。深井水加入 个浓度水平： 和 0.01 0.10 0.40 μg/L 2 0.01 。可饮用的自来水 （来自地表水 加入 个浓度水平： 5000 0.10 μg/L ) 2 0.01 和0.10 μg/L。每批所有样品均以随机顺序分析两次。 0 12 12.5 13 13.5 14 14.5 15 15.5 16 16.5 Minute 图2. 添加0.1 μg/L 莠去津的自来水 表3 方法性能数据 井水 自来水 化合物 % 回收率 %RSD % 回收率 %RSD LOD (μg/L) 苯嗪草酮 101.0 4.9 101.5 3.8 0.0039 氯草敏 99.4 6.7 98.4 4.1 0.0055 灭草隆 102.1 4.7 98.4 4.9 0.0038 长杀草 100.6 6.4 96.4 6.2 0.0054 西玛津 101.7 5.1 98.2 4.0 0.0049 氰草津 99.5 4.2 99.3 5.3 0.0073 绿麦隆 99.2 5.3 99.3 5.3 0.0044 莠去津 99.1 3.4 97.0 3.3 0.0020 敌草隆 100.8 4.6 97.7 3.8 0.0042 异丙隆 100.8 4.3 98.5 4.9 0.0037 利谷隆 102.5 5.1 99.9 3.1 0.0075 扑灭津 101.4 5.0 100.5 4.3 0.0035 特丁津 100.5 6.3 99.5 3.8 0.0038 草达津 102.5 5.4 100.5 4.3 0.0043 扑草净 102.0 4.8 101.1 4.5 0.0045 去草净 102.3 6.0 100.8 4.0 0.0054 57 ----------------------- 页面 58----------------------- 脂溶性维生素 主要分析物 9 T A = 视黄醇 A 视黄醇异构体 A 1 11,13-di-cis- 1 3 13-cis- 1 9 , 13 1 7, 基质 3 1, 1 1 9, 11, 13-tri-cis- 1 3 , , 9 ,1 9 7 1 标准 1 T 9, 13-di-cis- 9 A 11-cis- 1 B 1 参考文献 3 3 7, 11-di-cis- 1 1 , 9-cis- 9 3 , 1 1 1 1 1 , 7, 9 7, 9-di-cis- Robert Ricker, “Separation of Retinol (Vitamin A) Isomers: T 7, 13-di-cis- 1 A Comparison of Mobile-Phase Composition,” C 3 1 3 AT 所有反式视黄醇 1 1 安捷伦科技出版物5988-6361EN, 9, 3 9 B-F = 视黄醇异构体 1 , 1 www.agilent.com/chem/cn 1 1, 1 9 , 7 T A 1 1 3 D 1 3 1 9, 3 9 1 , 1 1 1 系统概况 3 9, 1 1 , , 7 7 LC系统 T A 1 E 1 9 等度 9 , 3 3 7 1 1 , 检测 9, 3 1 1 1 3 1 9, , 7 DAD 色谱柱 1 T A F 1 3 3 1 1 ZORBAX Sil, 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 9, 9 3 1 , 1 色谱柱部件号 3 1 1 , , 9 7 880952-701 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Time (min) 承蒙G. Noll Physiologisches Inst.许可– Justus Liebig Uni. Giessen 条件 色谱柱 ZORBAX Sil, 4.6 mm X 250 mm 安捷伦部件号880952-701 流动相 二氧六环 甲基叔丁基醚 正己烷 , ( ), 进样量 20 μL, 25 °C 58 ----------------------- 页面 59----------------------- 脂溶性维生素 主要分析物 0.22 室温 0.22 2 50 °C 脂溶性维生素 0.20 1. 视黄醇 0.20 0.18 2. 视黄醇醋酸酯 0.18 基质 0.16 2 3. 维生素 D3 0.16 5 0.14 4. g-生育酚 0.14 1 5. a-生育酚 标准 0.12 6. 生育酚醋酸酯 0.12 6 0.10 1 5 0.10 7. 视黄醇棕榈酸酯 0.08 0.08 3 参考文献 0.06 3 6 0.06 4 7 0.04 0.04 Robert Ricker and Thomas Schellenberger, "Fat-Soluble 0.02 4 7 0.02 Vitamins on ZORBAX XDB-C8," 安捷伦科技出版物 0.00 0.00 5988-6359EN, www.agilent.com/chem/cn 0 5 10 15 20 25 30 0 5 10 15 20 25 30 Minutes Minutes 系统概况 条件 LC系统 色谱柱 ZORBAX XDB-C8, 150 mm X 4.6 mm, 5 μm 等度 (安捷伦部件号993967-906) 检测 流动相 A: 水5%, B: 甲醇95% 流速 1 mL/min DAD 柱温 50 °C 色谱柱 检测器 DAD, 检测波长280 nm ZORBAX XDB-C8, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 色谱柱部件号 993967-906 59 ----------------------- 页面 60----------------------- 脂溶性维生素 主要分析物 100 255.2 e 纯标样 c n 80 维生素 D3 维生素 a D3 d n 271.1 MS3 u b 60 213.0 241.3 A m/z 385 → 367 → 基质 e 227.2 v i 40 185.0 10-μL 定量管进样 t 285.3 a l 325.5 家禽饲料 e R 20 158.6 % 349.2 367.6 参考文献 0 150 200 250 300 350 400 500 m/z Linda L. Lopez and Paul C. Goodley, “快速检测家禽饲料中的 e 100 255.1 家禽饲料提取物 c 维生素D3” 安捷伦科技出版物5968-9408CHCN, n 80 MS3 a d www.agilent.com/chem/cn n m/z 385 → 367 → u b 60 A 241.2 10-μL 定量管进样 e v i 40 t 213.1227.2 285.4 a l e 185.0 271.1 311.2 R 20 158.5 325.5 353.2 % 0 150 200 250 300 350 400 500 系统概况 m/z LC系统 将纯标准维生素 D3 和富集的家禽饲料提取物产生的 图谱进行比较 二元梯度 检测 MSn离子阱APCI+ 条件 色谱柱 流动相 醋酸 甲醇 0.05% : (50:50) 流动注射– 无柱 流速 0.6 mL/min 色谱柱部件号 进样量 10 μL 检测器 MSD 离子阱 NA 电离APCI (正离子) 喷雾器压力40 psi 干燥气10 L/min, 350 °C 锥孔电压1 15.0 V 毛细管出口补偿60.0 V 平均2 ICC 打开 最长累加时间200 ms 目标50000 确证 MS图谱信息和RT 60 ----------------------- 页面 61----------------------- 脂溶性维生素 主要分析物 3 1 视黄醇 (A) 脂溶性维生素A, D, E 800 2 胆骨化醇 (D3) 2 3 α-生育酚 (E) 基质 ] 600 U A m 1 [ 标准 , e c 400 n a b r o 参考文献 s b A 200 Udo Huber, “Analysis of Fat-Soluble Vitamins by HPLC,” 0 安捷伦科技出版物5968-2970E, www.agilent.com/chem/cn 0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 Time [min] 图1. 三种脂溶性维生素的分析 系统概况 条件 LC系统 色谱柱 ZORBAX Eclipse XDB-C18, 四元梯度 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 检测 流动相 A = 水， B = 甲醇 DAD 流速 1.0 ml/min 色谱柱 梯度 0分钟时 90% B ，15分钟时100 % B， ZORBAX Eclipse XDB-C18, 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 20 分钟100% B 色谱柱部件号 冲洗色谱柱 21分钟时用90%B 7995118-344 UV 检测器 可变波长检测器210 nm, 标准流通池 柱温箱 20 °C HPLC性能 化合物 LOD for RT精密度 峰面积精密度 S/N = 2 (10次分析的RSD) (10次分析的RSD) (mg/L)* (1000 mg/L)* (1000 mg/L)* 视黄醇 4.0 0.10 0.14 胆骨化醇 2.5 0.04 0.16 生育酚 2.0 0.04 0.20 进样量： * 5 μL 61 ----------------------- 页面 62----------------------- 水溶性维生素 主要分析物 2 水溶性维生素 1. B1 - 硫胺 2. 维生素C 基质 3. B3 - 烟酸 4. B - 吡哆醇 6 标准 5. 泛酸 6. 叶酸 7. B12 - 氰钴胺素 8. B - 核黄素 参考文献 2 Robert Ricker, “Separation of water-soluble vitamins using reversed phase chromatography,” 安捷伦科技出版物 5988-6365EN, www.agilent.com/chem 5 6 7 4 系统概况 LC系统 8 四元或二元梯度组件 1 3 检测 DAD 色谱柱 0 2.5 5 7.5 10 12.5 min ZORBAX SB-C8, 150 mm X 4.6 mm, 5 μm 色谱柱部件号 883975-906 条件 色谱柱 ZORBAX SB-C8, 150 mm X 4.6 mm, (安捷伦部件号883975-906) 流动相 磷酸钠甲醇 A: 50 mM : (90 : 10) 磷酸钠甲醇 B: 50 mM : (10 : 90) 梯度 0分钟0% B ， 18分钟70% B 流速 1 mL/min 柱温 室温 进样量 10 μL 检测器 DAD, 检测波长245 nm 62 ----------------------- 页面 63----------------------- 水溶性维生素 主要分析物 20 烟酸 维生素 B2 水溶性维生素 泛酸 基质 15 猫粮 10 叶酸 参考文献 B6 Robert Ricker and Thomas Schellenberger, “Rapid analysis 5 维生素 B1 of water-soluble vitamins with extraction from cat food,” UV = 200nm 安捷伦科技出版物5988-5761EN, 0 4 www.agilent.com/chem/cn 0 2 4 6 8 10 12 min 条件 系统概况 色谱柱 ZORBAX SB-C18, 75 mm X 4.6 mm, 3.5 μm LC系统 (安捷伦部件号866953-902) 流动相 A: 1-L 水, 2.5 g 己烷磺酸钠、2.5-mL醋酸, 4 g 四元或二元梯度组件 NaH PO 、50 μL 三乙胺 2 4 检测 B: 600 mL水、2.5 g 己烷磺酸、2.5 mL 醋酸、 50 L 三乙胺、400-mL 乙腈 DAD 梯度 0分钟0% B ， 色谱柱 3.6分钟0% B ， 见右侧介绍 6分钟20% B、 13.5分钟55% B、 14.4分钟90% B、 16.5分钟90% B、 16.8 分钟0% B、 20分钟0% B 流速 1.9 mL/min 柱温 室温 进样量 20 μL 检测器 DAD, 检测波长275 nm 63 ----------------------- 页面 64----------------------- 系统配置 应用领域– 碳水化合物、糖、糖醇 主要分析物 LC溶剂输送系统* 检测** 注释 出版号 页码 碳水化合物 等度G1310A 示差折光检测器 5988-6351EN 5 糖醇 等度 – G1310A MSD APCI 5988-4236EN 6 右旋糖酐 等度G1310A 示差折光检测器 5988-0118EN 7 淀粉 等度G1310A 示差折光检测器 5988-0117EN 8 碳水化合物 等度G1310A 示差折光检测器 5966-0637EN 9 应用领域– 染料、着色剂、色素 苏丹染料 二元梯度 MS TOF ESI+ 5989-4736EN 10 G1312A 或G1312B FDC食品染料，防腐剂 四元梯度G1354A DAD 5988-6355EN 11 花青素 二元梯度 MSD ESI+ APCI 5968-2979E 12 G1312A或G1312B 应用领域– 脂肪和油脂 磷脂 制备/35900E ELSD (ESA) ，某些用MSD 5989-2848EN 14 甘油酸三酯 等度G1310A MSD APCI+ 5988-4235EN 15 甘油酸三酯 二元梯度 MSD APCI+ 5968-0878E 16 G1312A或G1312B 甘油酸三酯及其过氧化物 四元梯度G1354A DAD 3通道 5966-0744E 17 应用领域– 香料、甜味剂、有机酸 香料、甜味剂、防腐剂 1200SL DAD 5989-5178EN 18 有机酸 四元梯度G1354A DAD 5989-1265EN 19 调味剂 二元梯度 DAD 5988-6353EN 20 G1312A或G1312B 半挥发性香料 等度G1310A DAD 5988-6352EN 21 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯、 等度G1310A DAD 5988-6349EN 22 表面活性剂 应用领域– 药草补剂、天然产物、植物激素 黄嘌呤代谢物 等度G1310A DAD 5989-5237EN 23 甘草甜素 1200SL DAD 5989-4907EN 24 黄嘌呤 1200SL DAD 2-μL流通池 5989-4857EN 25 人参皂甙第 部分 + 1 1200SL MS TOF ESI 5989-4506EN 26 花青素 制备 DAD 5989-0591EN 27 花青素 四元或二元梯度组件 DAD 5988-6362EN 28 类黄酮、儿茶酚 四元或二元梯度组件 DAD 5988-6357EN 29 应用领域– 防腐剂 香料、甜味剂、防腐剂 1200SL DAD 5989-5178EN 30 防腐剂、苯氧乙醇 四元或二元梯度组件 DAD 5989-3635EN 31 64 ----------------------- 页面 65----------------------- 系统配置 续 ( ) 应用– 蛋白质、多肽、氨基酸 主要分析物 LC溶剂输送系统 检测 注释 出版号 页码 蛋白质 四元或二元梯度组件 DAD 比较了各种键和相 5988-6358EN 32 蛋白质 四元或二元梯度组件 DAD 柱温对分离质量和 5988-6348EN 33 选择性的影响 BSA (牛血清白蛋白) 二元梯度 [DAD] 快速 5988-6081EN 34 裂解液、多肽 G1312A 或G1312B AAA 氨基酸 四元或二元梯度组件 [FLD/OPA-FMOC] 柱前衍生 5980-1193EN 35 应用领域 控制使用的 危险的药物 – / 药物 1200SL MSMS QQQ 脱机SPE 5989-5319EN 36 ESI± 硝基呋喃 二元梯度 MSn离子阱 5989-0738EN 37 G1312A或G1312B XCT ESI+ 氟喹诺酮 二元梯度 MSD ESI+ 5989-0596EN 38 G1312A或G1312B 氯霉素 二元梯度 MSD和MSn 5988-9920EN 39 G1312A或 离子阱 – G1312B ESI 磺胺药物 四元或二元梯度组件 DAD 5988-7135EN 40 磺胺药物 CapLC DAD MSD ESI+ 5980-2499EN 41 应用领域 控制使用的 危险的其它物质 – / HMF羟甲基呋喃 二元梯度 MSD APCI+ 5989-5403EN 42 G1312A或G1312B 丙烯酰胺 双 通阀， + 6 MS TOF ESI 5988-2884EN 43 用于自动SPE 铬形态 Metrohm 818泵 IC-ICPMS 柱子通常与ICP-MS 5989-2841EN 44 Agilent 7500 ISIS 捆绑销售，了解详情 进样器 请与销售代表联系 高氯酸盐 – Metrohm IC MSD ESI 5989-0816EN 45 三甲胺基砷 等度G1310A ICP-MS 5988-9893EN 46 应用领域 控制使用的 危险的天然毒素 – / DSP 海藻毒素 四元梯度G1354A MSD ESI± 5989-2912EN 47 毒枝菌素、烟曲霉素 二元梯度 MSD ESI+ 5968-2124E 49 G1312A或G1312B 黄曲霉素 + 分离前 溴化 Agilent/Gerstel MSD ESI B1 ASM514 50 在线 并对 进行分离 SPE G1 65 ----------------------- 页面 66----------------------- 系统配置 续 ( ) 应用领域 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 – / 主要分析物 LC溶剂输送系统 检测 注释 出版号 页码 44种杀虫剂 二元梯度 MSMS QQQ SPE净化 5989-5459EN 51 G1312A和G1312B ESI+ 酸性除草剂 自动SPE/1200SL DAD 5989-5176EN 52 带双二元泵和 通阀 6 采后杀菌剂 二元梯度 MS TOF, QuECHERS 5989-2728EN 54 G1312A或G1312B MSn离子阱 样品制备 均采用ESI+ 氯化烟碱类杀虫剂 二元梯度 MS TOF, 5989-1842EN 55 G1312A或G1312B MSn离子阱 均采用ESI+ 苯基脲类、三氮苯类 两个双位 通阀 ± 6 MSD APCI 5989-0813EN 56 除草剂 用于自动SPE 应用领域– 脂溶性维生素 视黄醇异构体 等度G1310A DAD 5988-6361EN 58 脂溶性维生素 等度G1310A DAD 5988-6359EN 59 维生素D3 二元梯度 MSn 离子阱 5968-9408E 60 G1312A或G1312B APCI+ 脂溶性维生素A, D, E 四元梯度G1354A DAD 5968-2970E 61 应用领域– 水溶性维生素 水溶性维生素 四元或二元梯度组件 DAD 5988-6365EN 62 水溶性维生素 四元或二元梯度组件 DAD Titriplex-V热提取 5988-5761EN 63 * 进样器，包括温度调节组件的选择，应当考虑经费预算和用户需求。可征询安捷伦代理商或销售代表的建议。 标明等度处，可选择等度、二元或四元泵组件。二元和四元梯度组件具有更大的灵活性。等度泵可以升级为四元梯度泵。 标明二元梯度处，当使用 或更高流速，通用的 和 柱子时，通常可以用四元梯度替代。对于梯度曲线更陡的更快梯度，如高通量环境分析，二元梯度组件更 1 mL/min 3 4.6-mm id 为适合。 ** 对于标明DAD处，请仔细阅读原应用报告，确定是否需要光谱信息或多波长监测。如果没有这方面的需要，可以用多波长或可变波长检测器代替。对于2.1-mm应用，特别是对于 1.8-μm粒径柱子，要考虑使用更小体积的流通池，以最大限度地减少柱外扩散。 对于 检测器需要用户确定纳流或毛细管 的离子源 即， 、 、多模式 、 、 、双喷雾 、 ，以及其它离子源。 MS LC ( APCI ESI ESI/APCI AP-MALDI APPI/APCI ESI [TOF] ChipCube ESI ) 不是所有的 检测器组件都可以进行正 负极性切换。请仔细阅读原应用报告，考虑将来的需求确定是否需要这项功能。 MS / 66 ----------------------- 页面 67----------------------- 食品快速参考指南 碳水化合物、糖、糖醇 页码 主要分析物 基质 LC系统 检测 流动相 参考文献 5 碳水化合物 等度 示差折光检测器 ACN/水 5988-6351EN 6 糖醇 饮料 等度 – 水 MSD APCI ACN/ 5988-4236EN 7 右旋糖苷 等度 示差折光检测器 水 5988-0118EN 8 淀粉 等度 示差折光检测器 0.1M NaNO3 5988-0117EN 9 碳水化合物 柠檬水 等度 示差折光检测器 水H SO 5966-0637EN 2 4 染料、着色剂、色素 10 苏丹染料 食品 二元梯度 MS TOF ESI+ ACN/水 5989-4736EN 醋酸铵 11 FDC食品染料 标样 四元梯度 DAD MeOH/水 5988-6355EN 防腐剂 TFA/TEA 12 花青素 圆白菜 二元梯度 MSD ESI+ ACN/水 5968-2979E APCI 甲酸 脂肪和油脂 14 磷脂 大豆 制备/35900E ELSD (ESA), 甲醇IPA, 5989-2848EN 有些用 己烷醋酸铵水 MSD , , 甘油酸三酯 等度 + 丙酮 水 15 MSD APCI / 5988-4235EN 16 甘油酸三酯 食用油 二元梯度 MSD APCI+ IPA, n-丁醇 5968-0878E 水 17 甘油酸三酯 食用油 四元梯度 DAD 3通道 ACN/MTBE/ 5966-0744EN 及其过氧化物 水 香料、甜味剂、有机酸 18 香料，甜味剂 软饮料 1200SL DAD ACN/水 5989-5178EN 防腐剂 Amm. HPO4 甲酸 19 有机酸 食品 四元梯度 DAD ACN/水 5989-1265EN 20 mM磷酸盐 20 调味剂 漱口水 二元梯度 DAD ACN/水TFA 5988-6353EN 21 半挥发性香料 等度 DAD MeOH/水 5988-6352EN 22 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯 可乐类饮料 等度 DAD ACN/水TFA 5988-6349EN 药草补剂、天然产物、植物激素 23 黄嘌呤代谢物 等度 DAD ACN/水 5989-5237EN 25 mM磷酸 24 甘草甜素 甘草 1200SL DAD ACN/水醋酸 5989-4907EN 25 黄嘌呤 茶，巧克力 1200SL DAD 2-μL池 ACN/水甲酸 5989-4857EN 26 人参皂甙第 部分 人参 + 水 1 1200SL MS TOF ESI ACN/ TFA 5989-4506EN 27 花青素 蓝莓 制备 DAD MeOH/水TFA 5989-0591EN 28 花青素 梯度 DAD MeOH/水 5988-6362EN 磷酸 29 类黄酮、儿茶酸 梯度 DAD MeOH/水TFA 5988-6357EN 67 ----------------------- 页面 68----------------------- 食品快速参考指南 （续） 防腐剂 页码 主要分析物 基质 LC系统 检测 流动相 参考文献 30 香料甜味剂 软饮料 1200SL DAD ACN/水 5989-5178EN 防腐剂 AmmHPO4 31 防腐剂，苯氧乙醇 梯度 DAD MeOH/水 5989-3635EN 蛋白质、多肽、氨基酸 32 蛋白质 小麦 梯度 DAD ACN/水TFA 5988-6358EN 33 蛋白质 小麦 梯度 DAD ACN/水TFA 5988-6348EN 34 BSA (牛血清白蛋白) 二元梯度 DAD ACN/水TFA 5988-6081EN 裂解物，多肽 35 AAA氨基酸 梯度 FLD/OPA-FMOC ACN,MeOH, 5980-1193EN 水, Na HPO , 2 4 NaOH 控制使用的 危险的药物 / 36 药物 水 1200SL MSMS QQQ ACN/水 5989-5319EN ESI± 甲酸铵 37 硝基呋喃类 家禽，虾 二元梯度 MSn Trap XCT ACN/水 5989-0738EN ESI+ 醋酸 38 氟喹诺酮 牛肾 二元梯度 MSD ESI+ ACN/水 5989-0596EN 甲酸 氯霉素 虾 蜂蜜 二元梯度 和 水 39 , MSD MSn MeOH/ACN/ 5988-9920EN 离子阱 – 醋酸铵 ESI 40 磺胺药物 肉 梯度 DAD ACN/水 5988-7135EN H3PO4 41 磺胺 CapLC DAD MSD ACN/水 5980-2499EN ESI+ 甲酸 控制使用的 危险的其它物质 / 42 HMF 面包，谷类食品 二元梯度 MSD APCI+ 水醋酸 5989-5403EN 羟甲基呋喃 酸奶 G1312A或G1312B 甲酸 丙烯酰胺 饮用水 二元泵带 通 + 水 43 6 MS TOF ESI ACN/ 5988-2884EN 阀，用于自动SPE 甲酸 44 铬形态 Metrohm Metrohm 818泵, IC-ICPMS 水Na EDTA 5989-2481EN 2 Agilent 7500 ISIS NaOH 进样器 高氯酸盐 水，蔬菜 – 水 45 Metrohm IC MSD ESI MeOH/ 5989-0816EN 30 mm NaOH 46 三甲胺基砷 鱼类 等度G1310A ICP-MS AmmHCO3 5988-9893EN 酒石酸，甲醇 控制使用的 危险的天然毒素 / 47 DSP 海藻毒素 贝类 四元梯度 MSD MeOH/水 5989-2912EN ESI± 甲酸 49 毒枝菌素，烟曲霉素 谷物 二元梯度 MSD ESI+ ACN/水 5968-2124E 醋酸铵 50 黄曲霉素 各种食品 Agilent/Gerstel MSD ESI+ ACN/水 00060329.pdf 在线SPE 甲酸 68 ----------------------- 页面 69----------------------- 食品快速参考指南 （续） 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 / 页码 主要分析物 基质 LC系统 检测 流动相 参考文献 51 44种杀虫剂 蔬菜，水果 二元梯度 MSMS QQQ ACN/水 5989-5459EN ESI+ amm.甲酸 52 酸性除草剂 水 自动SPE/1200SL DAD ACN/水 5989-5176EN 带双二元泵 通阀 6 H PO 3 4 54 采后杀菌剂 柑橘 二元梯度 MS TOF, ACN/水 5989-2728EN MSn离子阱 甲酸 ESI+ 55 氯化烟碱类杀虫剂 蔬菜，水果 二元梯度 MS TOF, MSn ACN/水 5989-1842EN 离子阱，ESI+ 甲酸 56 苯基脲类、三氮苯类 水 双二元泵 MSD MeOH/水 5989-0813EN 除草剂 6通阀用于自动SPE APCI± 甲酸 脂溶性维生素 58 视黄醇异构体 等度 DAD 二氧六环 5988-6361EN (MTBE), 己烷 59 脂溶性维生素 等度 DAD MeOH/水 5988-6359EN 60 维生素D3 家禽饲料 二元梯度 MSn离子阱 MeOH/水 5968-9408E APCI+ 醋酸 脂溶性维生素 、 、 四元梯度 水 61 A D E DAD MeOH/ 5968-2970E 水溶性维生素 62 水溶性维生素 梯度 DAD MeOH/水 5988-6365EN 磷酸盐 63 水溶性维生素 猫粮 梯度 DAD ACN/水, 5988-5761EN 醋酸，磷酸盐 TEA ，己烷磺酸盐 69 ----------------------- 页面 70----------------------- 液相色谱的基本原理 1903年俄国科学家Mikhail Tswett (1872-1919)首次使用经典 数是它的保留时间，即从进样到它被洗脱出来所经过的时间。 液相色谱 （ ）分离植物色素。 在其最初发表的论文 根据所用的检测器不同，也可以基于化学结构、分子量或某些 LC Tswett 中，称这项新技术为“色谱”，因为这种分析的结果是沿着吸 其它分子特性进行鉴定。 附剂柱长用“颜色写成的”。 HPLC 的第二个用途是定量分析，即确定样品中有什么组分， 色谱是一种分离技术，将少量液体样品放进 （或注入）一根 并测量每个组分的量 （或浓度）。解析一张色谱图或进行定量 管子，称为色谱柱，其中填充着叫做固定相的多孔颗粒。样品 有两种主要方法。第一种是测量色谱峰自基线的高度，第二种 中的各个组分在一种靠重力驱动的液体（称为流动相）作用下， 是测定其峰面积。要定量测定某个化合物，就要在同样条件下 沿填充柱向下移动。 进样含已知量目标化合物的样品或标准，测量其峰高或峰面积。 并对比随后分析的样品混合物中相同分析物的响应进行测量。 HPLC的第三个用途是纯化合物的制备。在检测器的出口收集 色谱峰，并除去溶剂使化合物 （也称为分析物）富集，可以 制备出纯物质以备将来使用 （如有机合成、鉴定、临床研究， 或毒性研究等）。这种方法叫做制备色谱。 各样品组分通过其分子与填料之间的各种化学和 或物理相互 / 作用被分离，流经的溶剂使其通过柱床。分开的组分在柱子的 出口被收集，并用一种外部测量技术进行鉴定，如分光光度计， 测定颜色深度，或用重量法，或其它能够测量分离组分量的技 术。现在把柱液相色谱的现代形式称为“flash chromatogra- phy”（快速分离色谱）。 高效液相色谱 （ ）是把少量液体样品注入一根填充着 HPLC 1 到 微米粒径填料 （固定相）的色谱柱中。泵通过高压驱动 10 一种液体 （流动相）使各样品组分沿柱子移动。 各组分与固定相和流动相的竞争性相互作用，以及组分分子与 HPLC仪器 填料颗粒之间的各种化学和 或物理相互作用，使样品组分彼 / 此分离。分离后的组分流出柱子时，由一台检测器测量各组分 虽然 和 的原理是一样的，但在分析速度、效率、灵敏 LC HPLC 的量。检测信号的图形输出称为“色谱图”。 度和操作的简便性等方面，HPLC更胜一筹。下面将介绍HPLC 系统的主要组成部分。 HPLC有三种用途：定性分析、定量分析和制备纯化合物。定 性分析用于鉴定样品中的单一化合物。鉴定化合物的最常用参 70 ----------------------- 页面 71----------------------- 泵 HPLC分离模式 H P L C 的泵驱动一种液体以特定的流速 （以每分钟毫升 四种主要类型的色谱柱根据分析物的性质进行分离。分离的主 (mL/min)表示）通过液相色谱仪。正常流速一般在0.2 到2 要例子或模式有反相、离子交换、正相和凝胶过滤及尺寸排阻 mL/min之间，毛细管和纳流分离可能更低，纯化分离可能更 色谱。 高。一般泵的压力可以达到6,000和9,000 psi (400和600 bar)。 在色谱实验过程中，泵输送的流动相组成可以是恒定的（等度） 或动态的 （ 梯度）。 进样器 进样器 （必须耐受系统的高压）将液体样品导入流动相的液流 中，它不会中断或干扰系统的流量或压力。典型的进样量是1 反相 和其它键合相。反相分离主要 (C18, ODS, C8, C4, CN, RP ) 到 微升 。进样器必须可以耐受系统的高压。当有很多样 20 (μL) 用于有机或水溶性化合物，其在有机 水混合物中的溶解度有 / 品要分析或对精度要求更高时，手动进样不能解决问题，就要 区别。 用自动进样器，即自动化的进样器。 这种分离模式是目前最常用的LC技术，因为其色谱柱耐用、 色谱柱 流动相与大多数样品基质都兼容，并可以利用各种分离机制。 这是色谱仪的心脏，色谱柱的固定相通过利用各种物理或化学 反相分离中所用的色谱柱一般填充着以多孔硅胶为基质的填 料，填料上键合着直链烷烃，如辛二甲基硅烷 （ 柱）或十 参数，分离感兴趣的样品组分。微小的填料颗粒 （ 微米） C8 < 10- 八碳二甲基硅烷 （ 柱或 。 紧密填充在柱子中，促成了样品组分的分离，同时也造成了正 C18 ODS） 常流速下的高反压。泵必须努力推动流动相流经柱子，形成的 流动相通常是由易与水混溶的试剂和溶剂混合而成。常用的有 阻力造成了色谱仪内的高压。 机溶剂为甲醇 （ ）、乙腈 （ 或 ）以及四氢呋 MeOH ACN MeCN 喃 （ ）。水、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液和离子对试剂 检测器 THF （ 例如烷基磺酸或四烷基铵混合物）经常使用。 检测器可以看见从色谱柱中流出来 （ 洗脱）的各种分子，其 通常在流动相的稀溶液中。检测模式包括UV/VIS、荧光、示 一般避免使用卤化物盐或腐蚀性酸 （例如，盐酸、高氯酸， 差折光、蒸发光散射、电导、电化学等各种形式，包括氧化还 以及硫酸），因为它们可能对仪器的不锈钢部件有腐蚀作用。 原测定、和质谱。检测器测量分析物的量，还可以提供鉴定或 虽然适当地小心可以使用几乎所有类型的试剂，但那些腐蚀性 （ 确证的辅助信息 光谱数据），化学家们因此能够对样品中的 试剂的使用可能会带来维护上的问题。 组分进行分析。检测器提供给记录器或计算机的信号形成液相 色谱图。 离子交换 (IEX, 阳离子交换[CX], 阴离子交换[AX])。离子交换 分离最常用于有机羧酸或磺酸、糖、蛋白质，传统的氨基酸分 计算机 析采用柱子后衍生技术，还用于DNA/RN Ａ相关化合物和寡 常被称为数据系统，通常用计算机控制所有HPLC仪器的系统 核苷酸、无机阴离子和阳离子，以及某些小分子有机胺。 组件，并采集和贮存检测器的信号。在最后一步里，计算机处 理来自检测器的信号并用这些信号确定样品组分的洗脱时间 （定性分析）和样品的量 （定量分析）。 71 ----------------------- 页面 72----------------------- 这些柱子以硅胶或交联的聚乙烯苯或甲基丙烯酸酯聚合物为基 溶剂通过，同时又能阻挡颗粒进入和填料漏出。也用过PEEK、 质材料，带电的位点 （阴离子的或阳离子的）共价键链接在 TEFLON(TM) 、其它惰性聚合物、玻璃和其它惰性材料。如果处 其表面上。这种模式所用的溶剂主要是缓冲液，有时为了改善 理得当，合理考虑化学兼容性，对样品进行适当处理，色谱 溶解度或选择性 （即改善分离）也添加一些有机溶剂。离子交 柱可以经历数千次进样而保持柱效不下降。 换常用梯度分离模式 （特别是复杂混合物，ＤＮＡ相关化合物、 柱尺寸和填料粒径和分离模式一样重要。分析柱的内径 （） 蛋白质、氨基酸）。 id 一般从 到 ，柱长从 道 。 1.0 6.0 mm 10 300 mm 正相 吸附和硅胶。正相是目前使用最少的技术，在全球总应 ( ) 用中仅占5% 以下。这类柱子的基质材料是硅胶，一般不衍生 小内径柱子消耗的溶剂少，可以提高检测灵敏度，并能够在 与质谱 （ ）和蒸发光散射检测器 （ ）兼容的流速下 化，有时也加上氰丙基或氨丙基。正相使用的几乎都是非极性 MS ELSD 溶剂，这些溶剂一般与水不混溶。这种模式首先的分离包括制 工作。但是，小柱床体积容易因柱外扩散或谱带展宽造成分离 备色谱 （因为馏分中的溶剂容易去除）、某些脂溶性维生素如 度的损失。需要使用特殊的管线、接头和流通池，以最大限度 维生素Ａ和Ｅ、某些合成产物和某些聚合物添加剂。 地减少柱外体积，提高实际柱效，实际柱效总是比理论柱效 低。 凝胶渗透、凝胶过滤和尺寸排阻色谱 分别为 、 和 ( GPC GFC SEC)。所有这些模式都是基于分子在特定溶液 （在这里是流动 相比之下，更大内径的柱子在比较高的流速下工作 （一般为 相）中的尺寸。色谱柱可以以硅胶或聚合物材料为基质，带或 1.5到3 mL/min) ，柱床体积比较大，消耗的流动相也显著增 加。当这种柱子连接 或 类检测器时，可能需要分流。 不带共价键官能基，通常比分析分离所用的其它色谱柱更大， MS ELSD 价格更高。 大内径柱子允许使用更大的进样量和样品容量。也可以用分析 型的柱子进行低毫克水平的纯化。柱床体积更大使柱外扩散效 常用于合成的或天然的聚合物， 用于蛋白质或大肽等 应影响相对比较小。 GPC GFC 生物大分子， 最能反映其分离机理。 分离一般比较简 SEC SEC 单，基本上不需要开发流动相，通常用等度洗脱，具有良好 另外，用很短的柱子可以进行极快的分离，虽然柱效 （即分 的可检测性。这类分析柱比其它分离模式的柱子要大 到 倍， 离能力）将会降低。更长的柱子能得到最高的分离度，但进 3 10 但由于柱子和样品组分之间没有 （或一般不会发生）化学相互 行同样的分离要消耗更多的时间和溶剂。关于将分析方法从一 作用，样品组分移动的速度和流动相一样快或更快，所以分离 种尺寸的柱子转移到另一种柱子上，在流速、梯度或分析时间 能很快完成。分离时间从 分钟到 分钟，取决于样品的分 上要进行哪些调整，请参见下面的“方法转移”。 10 60 子体积范围。（分子量是在大多数情况下可以使用的类似语。） 粒径是另一个需要认真考虑的物理变量。我们早就知道，粒径 柱尺寸和材料 越小，粒径分布越窄，柱效就越高，即对分离度的贡献越大。 提高柱效与粒径的增大呈反比，因此，将粒径减小一半，柱 现代 柱一般是由不锈钢管制成的，其内部高度抛光，两 效就能提高一倍，实际分离度能增加 倍 （的平方根，根 HPLC 1.4 2 端用整体或可拆卸的多孔筛板密封。筛板的空隙设计成可以让 据标准分离度公式）。可是，操作压力却呈指数增加，因此， 72 ----------------------- 页面 73----------------------- 粒径减小一半，理论上将使压力增大4倍。由于这些原因，我 mL/min ，确保在一个操作平台上既可以进行半微量分析又能 们要将对分离度的需求和压力增加的负面影响进行平衡考虑， 进行半制备分离。在一个系统上可以运行任何HPLC和亚二微 因为压力增加可能影响系统的可靠性、柱寿命，可能使分析时 米 操作模式，很容易使用已有的和新建立的 方法， LC HPLC 间延长，因为一旦达到最大压力，就必须降低操作流速。 不需要重新验证，或进行大范围的再配置。 高分离度快速系统和方法的概念 图2. 包含MS检测器的模块式配置，实例 针对不同柱内径优化仪器设置 系列高分离度快速 的概念是：提高色谱分析速 Agilent 1200 LC 进行高通量样品分析时，主要关注的是缩短运行时间。要达到 度和分离度，同时保持压力最低。该系统比常规 的分析速 LC 这一目的，通常的做法是使用非常短的柱子，达到每分钟流速 度更快、分离度更高，从而获得了更高的样品通量和更高质量 的高柱体积。在灵活的RRLC系统概念中，我们可以选择2.1- 的数据。其优化了性能，同时最大限度地减少了超高压对仪器 、 和 内径 的柱子，每个都推荐了略有 可靠性和寿命可能的影响。 mm 3.0-mm 4.6-mm (id) 不同的仪器配置。使用2.1 mm id STM柱时最重要的是要将柱 通常，可以通过优化色谱柱、调节柱温、梯度延迟体积，以及 外体积减到最小。 降低柱外扩散体积，缩短分析时间、提高分离度和灵敏度。这 与常规系统配置相比，使用4.6 mm, 5-um柱子最大的区别是 些步骤确保了最可能好的系统性能，高速和高分辨分离，同时 从进样器之样品进入流路之处起，尽可能降低峰扩散。首先要 具有降低溶剂消耗和提高灵敏度的额外优点。用户可以感受到 把0.17-mm id 的毛细管换成更细的0.12-mm id ，柱外体积可 整个色谱过程的显著改善，特别是可以使用更高的操作压力， 以减少50%。进一步减少柱外体积的办法还有，柱温箱中使用 并与柱填料兼容。 经过特别设计的低扩散热交换器、为进出口流路特别设计小体 为安捷伦新系统开发的新高压泵，流速从0.05到5 mL/min ， 积流通池，以改善洗脱状况。总之，所有毛细管都要尽可能短， 最高压力达到600 bar。系统还配备了高效脱气机、600 bar低 尽可能少地使用两通。 扩散自动进样器和新UV 和MS 检测器。可以为LC/UV 及 经常听说色谱柱是“系统的心脏”。的确，根据广泛的用户需 LC/MS应用进行最高速度和分离度的优化，可以运行任何传 求正确地选择色谱柱，是方法开发和方法改进过程中的关键步 统的 方法，新的安捷伦系统使用非常灵活。流速从 到 LC 0.05 5 73 ----------------------- 页面 74----------------------- 骤。可改变的参数有柱长、内径和粒度。增加柱长和减小粒度 小结 都可以提高柱子的分离能力。增加柱长将使操作压力、溶剂消 系统的灵活性通常排在与系统性能与可靠性一样高的位置。 耗量和分析时间呈正比地增加。而减小粒度使压力成指数增加， RRLC系统的开发完全考虑了这三方面的因素，不仅具有高效 但对溶剂消耗和分析时间的影响较小，压力不能超过系统的最 性能，还兼顾了精密度、分离度和速度。用户可以利用方法设 高压力或用户的要求。减小柱内径是减低溶剂消耗的常用方法， 计和转化的工具，首先围绕一根特定的柱子设计方法，然后选 对分离和分析时间的影响较小。但是，由于柱外效应 （必须特 择优化的系统配置，以确保整体性能最优(关于解决方案指南 别关注这一负面的参数），柱效可以略有降低。 请参见其它章节，或访问www.agilent.com/chem/cn) 。有 2.1 mm 内径柱在LC/MS方法中很常用，因为其典型流速非常 各种液相色谱任务的用户可以选择一台或更多的RRLC 系统， 适合最通用的离子源。3 mm 内径柱是对系统要求更高的2.1 mm 运行广泛的方法，而不必考虑传统意义上的仪器局限，也不必 id柱和溶剂消耗大的4.6 mm 内径之间的折衷。与2.1 mm柱相 要只关注专用系统。 比，柱床体积几乎增加了2倍，可以使用更长光程、更大体积 只在这 400 μL 混合器 里断开 的UV流通池，提高了灵敏度，而又不会损失分离度。取决于 流路 600 bar阻尼器 T 形混合 离子源和流速，在MS前可能需要分流。 压力 传感器 压力传感器 清洗阀 最常用的柱子是4.6-mm 内径柱。这种柱子有范围最广泛的固 阻尼器 定相，允许有一定的柱外扩散，可以使用长光程的流通池， A B 400 μL 混合器 在纯信噪比基础上经常能提供最高的灵敏度。但是， 4.6 mm 清洗阀 id柱子每次分析的溶剂消耗最大。实际上，在类似的分析条件 下，进样同样的样品质量，柱体积越小，总是能得到越高的 只在这里断开 流路 灵敏度。 600 bar 阻尼器 T 形混合 压力 传感器 压力传感器 梯度延迟时间 低延迟体积 清洗阀 (120 μL) 清洗阀 安捷伦二元泵 可以优化为最小延迟体积或最大溶剂混合性 SL A B 能。可以使用两种流路，只需要拆掉两个接头。如果泵的内体 积相当大，梯度到达柱子的时间较长，从而使化合物沿着固定 相移动的时间变长。柱体积非常小时，需要更长运行时间来补 图2. 二元泵SL上如何在标准和低延迟体积配置间进行变化 偿这种延迟。对于更大或更长的柱子，浅的梯度 （一般在多肽 和其它生物大分子分离时），这不是个重要参数。通常，我们 方法转换 应该考虑延迟的柱体积数是多少，而不是绝对体积，与梯度分 析的总柱体积数相比。 有时为了将现有的方法用于新的用途，需要改变分离的规模。 这可能包括增加质量容量 （将分析分离放大成制备分离）、提 像所有安捷伦进样器一样， 型高效自动进样器 Agilent 1200 SL 高灵敏度 （减小柱尺寸提高流入检测器的平均峰浓度，以改善 也设计成当样品完全流出进样器系统后，可以用旁路模式 （先 检测能力），或提高通量。在每种情况下，根据简单的数学计 进的延迟体积减少功能）。使用户能够更灵活地控制很小的但 算，都可以确保将方法进行相应的缩放，按照您的要求得到需 有时也很明显的延迟体积，这种延迟体积与通过样品定量管输 要的容量、灵敏度、分离度和通量。 送梯度有关。 74 ----------------------- 页面 75----------------------- 经常要转化在填充 或 大颗粒填料的旧柱子上开发的分 虽然Van Deemter发现并用数学式表达了柱效和各种参数之间 5- 10-μm 析方法，简单地用更小粒度的柱子替代大柱子。这样做可以缩 的关系，但我们最感兴趣的是他发现，对于填充良好的HPLC 短分析时间、减少溶剂消耗、提高灵敏度，并确保与质谱离子 柱，任何粒径都有一个最佳线性流速，而且最佳流速随着粒径 源更兼容。 的增大而减小。这一点的实际应用意义正如以前讨论的，在于 粒径减小后，通常可以通过增加线性流速进行进一步优化，从 简单地说，一根含5 μm填料的250 mm长柱子，可以由150 而进一步缩短了分析时间。洗脱速度增大将减少绝对峰宽，为 长的 柱替代。如果长度 （）对粒度 （）的比例 mm 3 μm L dp 了确保色谱分离被准确地记录在采集到的数据文件中，可能需 相等，可以认为两根柱子具有同样的分离能力。溶剂的消耗按 要提高数据采集速率，降低信号过滤参数。 L1/L2降低，所以将250 mm柱长的分离转化成150 mm柱时， 溶剂消耗量每次分析减少了 倍。如果进样等量的分析物， 第二个重要的考虑是：经常被忽视的柱外扩散对实际或经验柱 1.6 灵敏度也将提高 倍，因为色谱峰经过同样柱效的更小柱子 效的影响。随着柱体积的减少，峰洗脱体积也相应减少。如果 1.6 ， 时，稀释被减少了。 使用的是较小粒径的填料 峰体积将进一步减少。液相色谱仪， 特别是分析物经过的区域，由各种连接毛细管和接头组成，可 已经证明，液相色谱/质谱离子源，特别是电喷雾电离模式， 以造成可观的谱带展宽。从进样器到检测器流通池，累积的扩 在较低流速下 （比液相色谱 紫外 （ ）光学检测方法所 / LC/UV 散因素降低了色谱柱性能，使实际柱效远远低于纯理论计算值。 用的更低）灵敏度较高，因此，也可以减少柱内径使分析在 在一台 系统中测出 到 的扩散是相当正常的。这 HPLC 20 100 μL 较低流速下进行。流速和不同柱内径之间的关系见方程1。 种效应在最小尺寸和最小粒径柱上 （其峰体积应该最小）的影 2 响并不成比例。一定要注意把柱外体积减到最小，实际操作中， Flowcol. 1 × Diam.column2 = Flowcol. 2 可以减少连接接头的数量，以及进样阀和检测器流通池的体 Diam.column1 (eq. 1) 积。 减少柱长和内径的综合作用对溶剂消耗的影响，再次设想进 在梯度分离中，流动相的组成从分析起始开始增加，直到感兴 样同样分析物质量到更小的柱子上，将使峰的相应成比例地增 趣的分析物从柱子中被洗脱出来，要想成功地将方法转移到比 大。虽然，通常进样质量依柱尺寸而缩放，可以计算出成比例 较小的柱子上，需要保留梯度斜率。很多出版物都把梯度斜率 的进样量，两个柱子的空体积之比乘以原柱子的进样量 （见方 称为每分钟变化百分率，用单位柱体积的变化百分率表示更有 程 。 2） 用。用这种方式，方法转化时可以将柱体积的变化准确地转化 成新的梯度条件。如果把梯度表中的每行梯度都看成一段的话， Volumecolumn2 Inj. vol.col. 1 × = Inj. vol.col. 2 我们可以用下列方程表示梯度： Volumecolumn1 (eq. 2) 对于等度分离，用上述条件一般都可以成功地进行方法转换， (End% – Start%) % Gradient slope = (eq. 3) 分离度几乎没有什么变化。还有几个影响转换结果的其它参数。 #Column volumes 第一个参数是相对于流速的柱效，或更确切地说，是相对于线 性流速的柱效，如van Deemter [1]等人所阐述的。第二个参 注意，使用每单位柱体积的变化百分率，而不是每分钟的变化 数是经常被忽略的柱外扩散效应对柱子实际或经验柱效的 百分率，可以让用户通过改变梯度时间和 或梯度流速来控制 / 影响。 75 ----------------------- 页面 76----------------------- 梯度斜率。梯度斜率值大将得到非常快的梯度，而分离度最小， 因 啡 醛 精 咖 草 - 降低梯度斜率将得到更高的分离度，但溶剂消耗量将增大，灵 糖- 4 香- 2 7 6. 酯 3 9 0 3 mAU 2 甲 9 . . 敏度有所降低。除非通过提高流速 （在压力允许的范围内）使 0 酸 0 醛 175 氨 甲 丙 苯 苯 - 梯度斜率降低，而不是延长梯度时间，否则，分析时间也会 150 酰 0 2 3 氨 . 125 冬 酯 1 更长。使用浅梯度能提高分离度，因为增加了有效容量因子 门 酸 酯 天 甲 酸 - 苯 100 9 - 梨 4 1 山 k’。这种情况和等度分离非常类似，提高容量因子k' ，将直接 8. 7 - 75 0 0. 1 6 知 3 1 增加分离度。 值达到 到 时这种影响非常明显，其后就没 50 未 1. K 5 10 - 2 5 4 25 . 0 什么太大改善了。在后面的例子里，我们将看到与上面讨论的 0 计算相关的结果。 -25 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 min 认真分析现有的梯度条件，并了解如何准确地计算新流速和梯 条件 度条件，可以更轻松而可靠地将现有方法转换成新的更快速或 更高分离度的分析条件。另外，了解柱外扩散，特别是使用小 ZORBAX SB-C18, 3.0 mm X 50 mm, 1.8 μm 柱温 45 °C 的和高分离柱，将确保良好柱效，这对于方法的成功转换非常 梯度 用氢氧化铵调 20 mM H3PO4 pH 3.65 （ 关键。 节）， 分钟内从 到 乙腈 1.5 10% 50% 梯度斜率 乙腈柱体积 2.8% / 要进一步了解有关信息，可阅读应用报告5989-2908EN 、 分析流速 2.0 mL/min 样品 标准各50 μg/mL ， 5989-4721EN 、5989-5176EN 、5989-5177EN 、5989- 溶于甲醇 水 （ ），进样 / 1/1 2.5 μL 5178EN、RRLC系统手册5989-4330EN和5989-5200EN。 总分析时间 3 分钟 检测 UV 210 nm, 6-mm 5-μL 流通池 0.12 mm 内径入口热交换器， mAU 因 啡 过滤器 秒 咖 0.2 - 600 1 0 7 . 6 酯 (数据文件SDADDS_3MM31029.D) 甲 500 酸 精 氨 醛 糖 丙 草 9- 苯 香 400 8 酰 - 3. 氨 5 样品制备技术 4 冬 5 9 . 门 9 酯 300 天 酸 - 4 甲酯 醛 0 苯酸 1 . 甲 8 3- 梨 苯 正确的样品制备是HPLC分析成功的重要因素。从溶解或稀释 200 5 山 - 0 . - 2 2 9 1 1 9 5. 4 5 2. 1 100 1 这样的简单技术，到多步骤去除基质干扰方法，有极为丰富的 1 1 4 0 6 9 . . 5 0 1 选择。样品处理过程的主要目标，是将样品制备成可进样的形 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min 式，与分析将要使用的操作条件兼容。互溶性和 兼容性是 pH 条件 这一步要考虑的主要因素。进一步的目标还包括：去除不想要 ZORBAX SB-C18 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 的基质组分，这些组分可能会使分析变复杂或时间延长，或降 柱温 30 °C 低分离柱或系统其它部件的使用寿命。 梯度 20 mM H PO pH 3.65 3 4 （ 用氢氧化铵调节） 25分钟内从10% 到50% 乙腈 过滤 梯度斜率 乙腈柱体积 2.8% / 分析流速 1.41 mL/min 样品过滤是最基本的步骤，目的是防止不溶性微粒对仪器和柱 样品 标准各50 μg/mL 寿命造成影响。如果某些基质组分接触流动相时产生沉淀，或 溶解在甲醇 水 （ ）中 / 1/1 15-μL 进样 强烈地或不可逆地吸附在柱填料上时，也可以考虑对这些基质 总分析时间 37.5分钟 组分进行选择性沉淀，然后过滤或离心。 检测 UV 230 nm, 10 mm 13 μL流通池, 过滤器 秒 默认 2 ( ) (Datafile SDADDS000006.D) 76 ----------------------- 页面 77----------------------- 萃取 凝胶渗透色谱 (GPC) 调节或不调节水相 而进行的液 液萃取技术，根据溶解度 已作为高效样品净化技术得到了应用。因为其分离机理是 pH / GPC 对一般类别的化合物进行选择性萃取，已经应用了很长时间。 根据尺寸而不是化学性质，所以它是一种非常有用的方法，能 虽然这对有限的样品很有效，但处理大量样品可能过于费力， 够从含各类小分子分析物的样品中去除脂类、蛋白质和其它较 除非有大规模自动化方法 （ 如自动吸液和振摇）。取决于基质 大分子。这种方法经常用于环境样品中各类分子的分析，特别 的复杂性，这些萃取技术可能不能有效地去除主要干扰物，或 是淤泥、土壤和其它固体基质，上述基质先彻底提取得到可溶 者可能遇到棘手的乳化问题，将限制速度，降低回收率和净化 性分析物和基质中的各种较大分子。应用报告5989-5401EN 和 效率。 5989-0181EN 中还有其它相关讨论。 ，固 液萃取，可能是一种更广泛地分离样品混合物的方 理想的样品制备 SPE / 便方法。这是一种简单而通用的开管柱液相色谱方法。利用一 理想的样品制备能够去除不想要的或有干扰的基质组分、缩短 种或多种色谱过程反相、吸附 正相，或离子交换，可以手动 - / 并简化分析、减少总的样品分析时间、降低每个样品的分析成 处理单个样品，或自动脱机处理更大量的样品。 本、延长柱寿命，并通过最终分析纯化的样品改善分析的总性 能。以往的综述文章以及样品前处理产品供应商所发表的文献 典型的SPE装置包括，各种尺寸的注射器针筒、装配了膜式滤 ， 中有范围广泛的各种技术可供选择 这些都将帮助您针对特殊 芯、简单的聚合滤芯和微型滤芯的小型SPE小柱，可以连接一 的样品制备需求采取现有的技术和材料。 次性注射器和 孔板兼容设备。 96 将HPLC组件、合适的色谱柱化学和流动相化学，以及有效的 在某些情况下，可以将SPE直接搬到液相色谱仪上，使其成为 样品处理恰当地结合在一起，是开发和使用耐用而可靠的分析 整个分析的一部分。当样品基质中颗粒或溶解的基质组分不太 和制备方法的关键，这些方法将在不同操作者的控制下，不断 多时，在线SPE技术通常使用填充在保护柱中的可反复使用的 产生良好的结果。要了解安捷伦科技所提供的各种硬件、化学 介质。馏分的分离通过一个切换阀进行控制，用另外一个泵输 产品和参考文献，请参考我们的通用产品目录或在线访问我们 送样品制备和SPE柱再生试剂，独立于主要分析硬件和柱子。 www.agilent.com/chem/cn。注册以后，您可以购买色谱组 这种方法在饮用水分析中的痕量富集中已被广泛应用，也用于 件、消耗品和备件；下载技术参考文献、浏览常见问题解答； 其它适合在线样品处理的其他更复杂基质。要了解更多信息， 或和我们联系获取更多的技术信息。 可阅读应用报告5989-0813CHCN和5988-9917EN。 这里采用的资料由安捷伦科技的Ron Majors和Mike Wood- man提供。 77 ----------------------- 页面 78----------------------- 应用参考索引 下表列出了安捷伦科技有关食品分析的应用。在这个指南中， 通过列在发行号后面的页码可以浏览最新的应用摘要。下面列 出的所有应用都可以通过安捷伦网站查阅全文 www.agilent.com/chem/cn。 碳水化合物、糖、糖醇 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 第 页 5988-6351EN 5 碳水化合物 等度 示差折光检测器 ZORBAX NH2 880952-708 或 乙腈水 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 840300-908 / 第 页 5988-4236EN 6 糖醇 饮料 等度 MSD APCI+ Asahipak NH -50 2D 替代 2 乙腈水 2 mm X 150 mm 843300-908 / 第 页 5988-0118EN 7 右旋糖苷 等度 示差折光检测器 PL aquagel-OH MXA 79911GF-MXA 水 7.5 mm X 30 mm, 8 μm 和79911GF-083 PL aquagel-OH 30A, 7.5 mm X 30 mm, 8 μm 5988-0117EN 第 页 8 淀粉 等度 示差折光检测器 Aq. GPC PSS Suprema 见应用报告 0.1M NaNO3 100 + 1000, 2 根 8 mm X 300 mm, 10 μm 型号的柱子 第 页 5966-0637EN 9 糖 柠檬水 等度 示差折光检测器 （ 下） 水 BioRad HPX-87 80°C H SO 2 4 5968-5144EN 糖、糖醇 等度 示差折光检测器 碳水化合物 乙腈水 ZORBAX NH2 840300-908, / 1 4.6 mm X 250 mm, 843300-908 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 5965-9797 糖 ECD PAD IEX NA 水, NaOH 2 染料、着色剂、色素 5989-4736EN 第10页 苏丹染料 食品 二元梯度 乙腈水 MS TOF ZORBAX XDB-C18 922700-902 / ESI+ 2.1 mm X 50 mm, 1.8 μm 醋酸铵 5988-6355EN 第11页 食品染料、防腐剂 四元梯度 乙腈水 FDC DAD ZORBAX XDB-C18 935967-902 / 4.6 mm X 50 mm, 3.5 μm TFA/TEA 5968-2979E 第12页 花青素 圆白菜 二元梯度 + 建议 乙腈水 MSD ESI Inertsil ODS3 SB-C18 / APCI 2.1 mm X 250 mm, 5 μm 2.1 mm X 150 mm, 甲酸 3.5 μm 5980-0914 食品染料、 甲醇水 FDC Henderson DAD ZORBAX XDB-C18 935967-902 / 防腐剂 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm TEA TFA 5965-9042 染料 分散性 塑胶 乙腈水 , DAD Hypersil BDS / 和可溶性 3 mm X 125 mm, 3 um TBAHS, H SO 2 4 78 ----------------------- 页面 79----------------------- 染料、着色剂、色素 （续） 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5964-3559 染料 DAD Hypersil 脂肪和油脂 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5989-2848EN 第14页 磷脂 大豆 Prep/35900E ELSD (ESA), Prep SIL 见应用报告 甲醇, IPA, 某些用 己烷盐 MSD 4.6 mm X 150 mm, 10 μm , , 21.2 mm X 150 mm, 10 μm 水, CHCl3 5988-4235EN 第15页 甘油酸三酯 等度 推荐 丙酮 水 MSD Develosil ODS OG-3 SB-C18, / APCI+ 4.6 mm X 75 mm 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 866953-902 5968-0878E 第16页 甘油酸三酯 食用油 二元梯度 MSD Hypersil MOS 推荐SB-C18 IPA,正丁醇, APCI+ 2.1 mm X 200 mm, 5 μm 2.1 mm X 150 mm, 水, 3.5 μm 甲酸铵 830990-902 5966-0744E 第17页 甘油酸三酯 食用油 四元梯度 DAD Hypersil MOS 推荐SB-C18 乙腈/MTBE/ 及其过氧化物 3通道 2.1 mm X 200 mm, 5 μm 2.1 mm X 150 mm, 水 3.5 μm 830990-902 5966-0635E 皂化脂肪酸 食物 DAD, Hypersil MOS ACN, THF, 3 衍生化 2.1 mm X 200 mm, 5 μm 水 5966-0634E 甘油酸三酯 橄榄油， 等度 示差折光检测器 Hypersil MOS ACN/丙酮 菜籽油 2.1 mm X 200 mm, 5 μm 5954-6269E 废型 甘油酸三酯 植物油 以前的HP DAD Hypersil MOS ACN, MTBE, 2.1 mm X 200 mm, 3 μm 水 香料、甜味剂、有机酸 5989-5178EN 第18页 香料、甜味剂 软饮料 乙腈水 1200SL DAD ZORBAX SB-C18 827975-302 / 防腐剂 4.6 mm X 250 mm, 5 μm, (1.8 μm) Amm, HPO4 3 mm X 50 mm 1.8 μm 880975-902 (600 bar) (5 μm) 5989-1265EN 第19页 有机酸 食品 四元梯度 乙腈水 DAD ZORBAX SB-Aq 883975-914 / 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 20 mM 磷酸盐 5988-6353EN 第20页 调味剂 漱口水 二元梯度 乙腈水 DAD ZORBAX SB-Phenyl 860975-912 / TFA 2.1 mm X 50 mm, 5 μm 5988-6352EN 第21页 半挥发性香料 等度 DAD ZORBAX XDB-Phenyl 963967-912 MeOH/水 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 5988-6349EN 第 22页 天门冬氨酰苯丙氨 可乐类饮料 等度 DAD ZORBAX SB-C18 酸甲酯表面活性剂 乙腈水 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 866953-902 / TFA 79 ----------------------- 页面 80----------------------- 香料、甜味剂、有机酸 （续） 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5966-0741E APM 天门冬氨酰 DAD/FLD w/ Hypersil ODS MeOH/水 4 苯丙氯酸甲酯 OPA deriv. 2.1 mm X 200 mm, 5 μm NaOAc 5966-0631E 苦味柚皮素 柑橘 乙腈水 DAD Hypersil BDS / 橘皮苷 4 mm X 125 mm, 5 μm H SO 2 4 5966-0630E 香草醛 杂质 乙腈水 DAD Hypersil BDS / 4 mm X100 mm, 3 μm H SO 2 4 5966-0627E 有机酸 葡萄酒 DAD BioRad HPX-87 水, H SO 2 4 药草补剂、天然产物、植物激素 5989-5237EN 第 23页 黄嘌呤代谢物 等度 乙腈水 DAD Eclipse Plus C18 959993-902 / 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 25 mm 磷酸盐 5989-4907EN page 24 甘草甜素 甘草 乙腈水 1200SL DAD ZORBAX SB-C18 RRHT, 829975-902 / 4.6 mm X 150 mm, 1.8 μm 醋酸 5989-4857EN 第 25页 黄嘌呤 茶、巧克力 不同部件号 乙腈 水 1200SL DAD RRHT 1.8 μm / 2 μL 流通池 不同尺寸 甲酸 5989-4506EN 第26页 人参皂甙第 部分 人参 乙腈水 1 1200SL MS TOF SB-C18 RRHT, 820700-902 / ESI+ 2.1 mm X 150 mm,1.8 μm TFA 5989-0591EN 第27页 花青素 蓝莓 制备 甲醇水 DAD Prep-C18, 410910-102 / 21.2 mm X 250 mm, 10 μm 440905-902 TFA 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 5988-6362EN 第28页 花青素 梯度 见应用报告 甲醇 水 DAD ZORBAX SB-C18 / 4.6 mm, 5 μm, and 3.5 μm 磷酸 5988-6357EN 第29页 类黄酮、儿茶酚 梯度 甲醇水 DAD ZORBAX SB-C8 863953-906 / 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm TFA 5989-5493EN 人参皂甙 人参 离子阱 乙腈水 1200SL MS SB-C18 820700-902 / TFA TOF采用 2.1 mm X 150 mm 1.8 μm ESI+ 和DAD 5989-4705EN 人参皂甙第 部分 人参 离子阱 乙腈水 2 1200SL MSn SB-C18 820700-902 / TFA ESI+ 2.1mm X 150 mm 1.8 μm 5989-0389EN 麻黄碱异构体 麻黄碱 MSD ESI+ SB-Aq 871700-914 水甲酸 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 5989-0261EN 麦角碱 真菌提取物 纳流 离子阱 纳柱未指定 未指定 LC MSn , 半制备LC ESI+ 80 ----------------------- 页面 81----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 （续） 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5988-7136EN 生物碱 白毛茛 乙腈水 DAD ZORBAX XDB-C18 963967-902 / 黄连素等 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm TEA 醋酸铵 5988-6285EN 植物生长激素 乙腈水 DAD SB-C8 866953-906 / 4.6 mm X 75 mm, 5 μm TFA 5988-5749EN 刺芒柄花素 红三叶草 四元梯度 乙腈水 DAD/FLD SB-C18 883975-302 / 3 mm X 150 mm, 5 μm HOAc 5988-2399EN 植物性雌激素 红三叶草 四元梯度 乙腈水 , DAD/FLD SB-C18 880975-902 / 糖苷, 4.6 mm X 250 mm, 5 μm H PO 3 4 异黄酮类 5988-0637EN 蒽醌类 大黄酸， 大黄 制备 乙腈水 - DAD SB-C18 883975-302 / 大黄素 3 mm X 150 mm, 5 μm, HOAc 21.2 mm X 150 mm, 5 μm 5980-2081E 麻黄碱, 麻黄 CE CEMS 75 μm 石英毛细管 不同部件号 硼酸盐 生物碱, 功劳木 黄连素, 其它 粉防己碱, 防己诺林碱, 绿原酸等 , 5968-8869E 人参皂甙 人参 离子阱 乙腈水 , MSn Ion SB-C18 863954-302 / 5 皂甙 ESI+ 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 醋酸 5968-6252 大黄酸 大黄素 大黄 乙腈水 , DAD SB-C18 883975-302 / 轻泻剂 3 mm X 150 mm, 5 μm, 846975-202 醋酸铵, H SO 2 4 9.4 mm X 150 mm, 5 μm 5968-2975E 阿托品 颠茄属 乙腈水 DAD SB-C8 866953-906 / 莨菪碱 莨菪 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm KH PO 2 4 5968-2974E 奎宁，奎尼丁 金鸡纳皮 乙腈水 DAD Purospher RP18 / (Cortex 4 mm X 125 mm, 5 μm KH PO 2 4 Cinchonae) 树皮 5968-2973E 槲皮素 银杏 DAD Hypersil ODS MeOH/水 山奈酚, (Gingko biloba) 4 mm X 125 mm, 5 μm H PO 3 4 异鼠李素 5968-2972E 大黄酸 大黄素 大黄 乙腈水 , DAD Hypersil ODS / (Rheum 4 mm X 125 mm, 5 μm 醋酸铵 palmatum) 5968-2884E 麻黄素 麻黄 乙腈水 , DAD SB-C8 866953-906 / 去甲麻黄碱 Ephedra sinica 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm KH PO 2 4 刺激剂 stapf 81 ----------------------- 页面 82----------------------- 药草补剂、天然产物、植物激素 （续） 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5968-2882E 儿茶酸 丹参提取物 乙腈水 , DAD SB-C8 866953-906 / 儿茶醛, 各种 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm KH PO 2 4 丹参黄酮 5966-2591EN 植物激素 乙腈水 DAD SB-C8 866953-906 / TFA 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 5965-9802E 儿茶酚 茶 ECD Hypersil BDS 推荐 MeOH/水, 4 mm X 250 mm, 5 μm XDB-C18 或 NaNO , H SO 3 2 4 卡套柱 SB-C18 化学 防腐剂 5989-5178EN 第30页 香料、甜味剂 软饮料 乙腈水 1200SL DAD ZORBAX SB-C18 827975-302 / 防腐剂 4.6 mm X 250 mm, 5 μm, (1.8 μm) 和 磷酸氢铵 3 mm X 50 mm, 1.8 μm 880975-902 (600 bar) (5 μm) 5989-3635EN 第31页 防腐剂, 梯度 DAD ZORBAX XDB-C18 963967-902 MeOH/水 苯氧乙醇 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 5988-6356EN 防腐剂 食品 乙腈水 DAD SB-C18 833975-902 / 4.6 mm X 30 mm, 3.5 μm H PO 3 4 卡套柱 5966-0629E 防腐剂 乙腈水 Wine dressing DAD Hypersil BDS / 4 mm X 125 mm, 5 μm H SO 2 4 5966-0628E 抗氧化剂 口香糖 乙腈水 DAD Hypersil BDS / 4 mm X 100 mm, 3 μm H SO 2 4 蛋白质、多肽、氨基酸 5988-6358EN 第32页 蛋白质 小麦 梯度 乙腈水 DAD ZORBAX 300 SB-CN, 883995-906, / TFA 6 300 SB-C8 883995-905 5988-6348EN 第33页 蛋白质 小麦 梯度 乙腈水 DAD ZORBAX 300 SB-C8 883995-906 / TFA 7 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 5988-6081EN 第34页 牛血清 二元梯度 乙腈水 快速 BSA ( DAD Poroshell 300 SB-C18 660750-902, / TFA 白蛋白 裂解液 ) , 2.1 mm X 75 mm, 5 μm 883750-902 多肽 ZORBAX 300 SB-C18 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 5980-1193EN 第35页 AAA氨基酸 梯度 FLD/ Eclipse-AAA 见应用报告 ACN, MeOH, 水 8 OPA-FMOC 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm Na HPO , NaOH 2 4 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 3 mm X 150 mm, 3.5 μm 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 82 ----------------------- 页面 83----------------------- 蛋白质、多肽、氨基酸 （续） 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5989-0015EN 蛋白质 各种 乙腈 水 DAD 300 SB-x, Poroshell SB-x / TFA 5988-7930EN 蛋白质，多肽 MSn 离子阱 MALDI NA NA AP/MALDI 5988-0897EN 多肽 离子阱 乙腈水 MSn 300 SB-C18 5064-8291 / 磷酸化 含谱库, 0.3 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 DAD 5980-2155 蛋白质 离子阱 未知 乙腈 水 CapLC MSn 180 μm 300A C18 / ESI+ 甲酸 5966-0746 AAA 氨基酸 啤酒 FLD OPA/ Hypersil ODS ACN, THF, 水, FMOC 2.1 mm X 200 mm, 5 μm NaOAc 控制使用的 危险的药物 / 5989-5319EN 第36页 药物 水 乙腈水 脱机 1200SL MSMS QQQ Extend-C18 728700-902 / ESI± 2.1 mm X 100 mm, 1.8 μm 甲酸铵 SPE 5989-0738EN 第37页 硝基呋喃 家禽 虾 二元梯度 离子阱 乙腈水 , MSn XCT ZORBAX XDB-C8 971700-906 / – 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 醋酸 ESI 5989-0596EN 第38页 氟喹诺酮 牛肾 二元梯度 + 乙腈水 MSD ESI ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 5988-9920EN 第39页 氯霉素 虾，蜂蜜 二元梯度 MSD和 ZORBAX XDB-C18 993967-902 MeOH/ACN/ MSn离子阱 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 水醋酸铵 – ESI 5988-7135EN 第40 页 磺胺药物 肉 梯度 乙腈水 DAD RP-18 Purospher 79925PU-584 / 4 mm X 250 mm 5 μm H PO 3 4 5980-2499EN 第41 页 磺胺药物 乙腈水 CapLC DAD MSD ZORBAX SB-C18 5064-8262 / ESI+ 0.5 mm X 150 mm, 3.5 μm 甲酸 5989-4858EN 雌激素 河水, MS TOF Luna Phenyl Hexyl 各种 异丙醇/ 10 污水， APPI– 2.0 mm X 150 mm 3 μm 见应用报告 环己烷 处理过的污水 w/保护柱 2.0 mm X 4 mm, 3 μm 5989-1302EN Poster 硝基呋喃 家禽，虾 乙腈水 MS TOF ZORBAX XCB-C18 971700-902 / 11 ESI+ 2.1 mm X 50 mm 3.5 μm 醋酸 5989-0182EN 磺胺药物 猪肉 乙腈水 MSD ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 12 APCI+ 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 83 ----------------------- 页面 84----------------------- 控制使用的 危险的药物 （续） / 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5988-8999EN 氯霉素 鱼 MSD ZORBAX XDB-C18 993967-302 MeOH/水 13 – 醋酸铵 APPI , 3 mm X 150 mm, 5 μm DAD 5988-8903EN 硝基呋喃 家禽 乙腈水 MSD Inertsil ODS3 / 14 ESI+, 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 DAD 5988-6926EN 类固醇 水 离子阱 乙腈水 MSn ZORBAX XDB-C18 971700-902 / 15 ± 醋酸铵 APCI , 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm + APCI , DAD 5966-1619 四环素 肉，食品 推荐 乙腈 水 DAD Hypersil BDS / 16 4 mm X 100 mm, 3 μm SB-C18 化学 H SO 2 4 5965-9794 抗菌素 肉 推荐 乙腈 水 , DAD Purospher RP18 / 磺胺 4 mm X 250 mm, 5 μm SB-C18 化学 H PO 3 4 5989-5505EN 砷形态 尿，水 LC-ICPMS ICPMS G3288-80000 G3288-80000 plus EtOH, 水, Arsenic column, G3154-65002 磷酸盐 4.6 mm X 250 mm (保护柱) EDTA, NaOAc, NaNO3 5989-3572EN 甲基汞, 水, LC/ICP-MS ICPMS ZORBAX XDB-C18 960967-902 MeOH/水 汞, 合成海水 2.1 mm X 50 mm, 5 μm 醋酸铵 乙基汞 土壤 2-巯基乙醇 5989-2883EN 酸性除草剂 水 – 乙腈水 , MSD ESI Extend-C18 763750-902 / 17 类固醇 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm 甲酸NH TEA 3 5989-2324EN 除草剂 Bialaphos MSn离子阱, Infusion NA NA 18 抗菌素, MS TOF, peptide bialaphos, 均采用ESI+ bilanaphos 5989-1270EN 各种杀虫剂 食品 各种条件 各种条件 各种条件 各种条件 19 药物 5989-0814EN 杀草强 地下水 MSD SB-C18 863954-302 MeOH/水 20 APCI+ 3 mm X 150 mm, 3.5 μm 醋酸铵 5989-0181EN EPA 3640A 植物油 GPC DAD 各种有机GPC 见应用报告 各种条件 21 混合标准 椰菜， 动物脂肪 5989-5403EN 第42 页 HMF 羟甲基- 面包，谷物 二元梯度 MSD Bonus-RP 861768-901 水醋酸 脱机 呋喃 酸奶 APCI+ 2.1 mm X 100 mm, 3.5 μm 甲酸 SPE 5988-2884EN 第43 页 丙烯酰胺 饮用水 两个双位 乙腈水 MS TOF ZORBAX SB-C18 883700-922 / 6通阀 ESI+ 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 用于自动SPE 84 ----------------------- 页面 85----------------------- 控制使用的 危险的其它物质 / 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5989-2481EN 第44 页 铬形态 水样 Metrohm 818 IC-ICPMS Agilent Cr G3268A 水Na EDTA 22 2 泵, Agilent 4.6 mm X 30 mm, 5 μm NaOH 7500 ISIS 进样器 5989-0816EN 第45 页 高氯酸盐 水, Metrohm IC MSD – MetroSep 见应用报告 MeOH/水 ESI 蔬菜 ASUPP-5 30 mm NaOH 4 mm X 100 mm 5988-9893EN 第46 页 三甲胺基砷 鱼 等度 ICP-MS Hamilton PRP X-100 联系 AmmHCO / 3 G1310A 厂商 酒石酸 5988-3161EN 溴酸盐 饮用水 水 硝酸铵 ICP-MS IC Dionex PA-100 , , 9.4 mm X 250 mm HNO3 5968-3049 溴酸盐碘酸盐 臭氧处理的 或 见应用报告 水 碳酸盐 , Yokagawa IC ICP-MS DAD IC , / 23 水 柱后衍生 重碳酸盐 5966-0633 阴离子 水 等度 间接 要了解有关反相柱 乙腈水 DAD, / NaOH 24 UV 和流动相的信息 plus UV 模式 请与作者联系 控制使用的 危险的天然毒素 / 5989-2912EN 第47 页 DSP 海藻毒素 贝类 四元梯度 MSD ZORBAX SB-C18 883975-302 MeOH/水 ESI± 3 mm X 150 mm, 5 μm, 和 甲酸 9.4 mm X 50 mm, 5 μm 846975-202 半制备 5968-2124E 第49 页 毒枝菌素 谷物 二元梯度 + 乙腈水 MSD ESI ZORBAX XDB-C18 993700-902 / 烟曲霉素 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 醋酸铵 00060329.pdf 第50页 黄曲霉素 各种食品 + 推荐 乙腈水 Agilent/ MSD ESI Phenomenex MAX RP SB-C18 / 25 Gerstel 2.1 mm X 250 mm, 5 μm 2.1 mm X 150 mm, 甲酸 在线SPE 3.5 μm 830990-902 5989-3634EN 黄曲霉素 DAD ZORBAX XDB-C18 963967-902 MeOH, ACN, 4.6 mm X 150 mm, 3.5 μm 水 5968-3796E 变性毒素 海藻 饮用水 推荐 乙腈 水 A, ( ) MSD Inertsil ODS3 / 26 生物碱 ESI+ 2.1 mm X 150 mm, 5 μm SB-C18 or 醋酸铵 神经毒素 XDB-C18 化学 5968-2123E 微囊藻素 淡水 （表层） + 推荐 乙腈 水 MSD ESI Mytisil ODS / 2.1 mm X 100 mm, 5 μm SB-C18 化学 甲酸 85 ----------------------- 页面 86----------------------- 控制使用的 危险的天然毒素 （续） / 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5966-0632 黄曲霉素, 各种食品 DAD/FLD 各种条件 各种条件 各种条件 27 毒枝菌素, 棒曲霉素等 5952-5852 废型 毒枝菌素 旧的 推荐 乙腈 水 HP MS Vydac 201HSB / 热喷雾 4.6 mm X 150 mm, 5 μm SB-C8 或XDB-C8 醋酸铵 (旧) 化学 5952-5852 各种真菌 各种食品 各种条件 各种条件 各种条件 原 毒素 5988A MS HP 热喷雾 应用报告 ( 旧) 5091-8692 毒枝菌素 各种食品 DAD w/ 各种色谱柱 见应用报告 各种流动相 谱库，FLD 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 / 5989-5459EN 第51页 种杀虫剂 蔬菜 二元梯度 乙腈水 44 , MSMS QQQ Extend-C18 728700-902 / SPE 水果 ESI+ 2.1 mm X 100 mm, 1.8 μm 甲酸铵 净化 5989-5176EN 第52页 酸性除草剂 水 自动 见应用报告 乙腈 水 SPE/1200SL DAD ZORBAX SB-C18 / 带双二元泵 5-, 3.5-, 和 H PO 3 4 6通阀 1.8-μm 柱 5989-2728EN 第54页 采后杀菌剂 柑橘 二元梯度 乙腈水 MS TOF, MSn ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 28 离子阱，均采 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 用ESI+ 5989-1842EN 第55页 氯化烟碱类 蔬菜 二元梯度 乙腈水 MS TOF, MSn ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 杀虫剂 水果 离子阱均采用 甲酸 , 4.6 mm X 150 mm, 5 μm ESI+ 5989-0813EN 第56页 苯基脲类 三嗪类 水 双二元泵 水 , MSD ZORBAX XDB-C8 971700-906 MeOH/ 除草剂 6通阀用于 APCI± 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 甲酸 自动SPE 5989-5469EN 种杀虫剂 蔬菜 乙腈水 100 MSMS QQQ ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 水果 ESI+ 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 5989-5320EN 杀虫剂 水 乙腈水 1200SL MSMS QQQ Extend-C18 728700-902 / 29 正，负ESI 2.1 mm X 100 mm, 1.8 μm 醋酸，甲酸 氢氧化铵 5989-3573EN 特丁津 橄榄油 乙腈水 MS TOF, MSn ZORBAX XDB-C8, 993967-906 / 30 离子阱均采 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 用ESI+ 5989-2209EN 杀真菌剂 蔬菜 乙腈水 , MS TOF, MSn ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 水果 离子阱 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 ESI+ 86 ----------------------- 页面 87----------------------- 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 （续） / 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5989-1924EN 杀虫剂 蔬菜 乙腈水 MS TOF, MSn ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 离子阱均采用 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 ESI+ 5989-1688EN 杀虫剂 饮用水 MSD Hypersil BDS ACN,MeOH, 水 ESI+ 2 mm X 100 mm, 3 μm 醋酸铵 5989-0930EN 各种物质包括 DAD Eclipse CN, C18 各种部件号 MeOH/水 杀虫剂 5989-0371EN 杀虫剂 水 乙腈水 MSD ZORBAX XDB-C18 930990-902 / 31 咪唑烟酸 ± 甲酸 ESI , DAD 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm 5989-0184EN 杀草强除草剂 水 MSD ZORBAX SB-C18 863954-302 MeOH/水 32 APCI+ 3 mm X 150 mm, 3.5 μm 醋酸铵 5988-8692EN 杀虫剂, DAD 3-mm RP色谱柱 各种部件号 各种流动相 抗菌素 5988-8595EN 除草剂 水 MSD ZORBAX XDB-C8 971700-906 MeOH/水 苯基脲类 ESI± 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 甲酸 三嗪类 5988-8449EN 杀虫剂 乙腈水 DAD ZORBAX SB-C18 880975-302 / 3 mm X 250 mm, 5 μm NaOAc 5988-7351EN 百草枯杀草快 水 双二元泵 乙腈水 MSD Extend-C18 763750-902 / 33 6通阀 ESI+ 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm TDFHA 用于自动SPE (tetradecafluoro- heptanoic acid) 5988-7220EN 百草枯杀草快 水 双二元泵 + 乙腈水 MSD ESI Extend-C18 763750-902 / 34 6通阀 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm TDFHA 用于自动SPE (tetradecafluoro- heptanoic acid) 5988-6686EN 嗪氨灵 乙腈水 DAD ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 杀真菌剂异构体 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 甲酸 5988-6635EN 杀虫剂 MSD ESI, ZORBAX XDB-C8 935967-906 ACN, MeOH, 35 苯基脲类, APCI, APPI 4.6 mm X 50 mm, 3.5 μm 醋酸 氨基甲酸酯 5988-5882EN 酸性除草剂 水 乙腈水 , MSD ZORBAX XDB-C18 930990-902 / 36 拿草特 – 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm 甲酸 ESI 5988-4981EN 草甘膦 水 乙腈水 , MSD ZORBAX XDB-C8 946975-906 / 37 AMPA ESI+ 4.6 mm X 50 mm, 5 μm 醋酸铵 87 ----------------------- 页面 88----------------------- 控制使用的 危险的杀虫剂和除草剂 （续） / 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5988-4708EN 氨基甲酸酯 蔬菜 + 乙腈水 MSD ESI ZORBAX XDB-C18 960967-902, / 椰菜 2.1 mm X 150 mm, 5 μm, 993967-902 醋酸铵 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 5988-4233EN 西玛津 + 甲醇水 , MSD ESI Inertsil ODS3 / 38 禾草丹, 2.1 mm X 250 mm, 5 μm 醋酸铵 福美联 5988-3844EN 糖基化 植物，玉簪属植物 – 乙腈水 MSD ESI 300SB-C18 883750-902 / 39 类黄酮 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 醋酸铵 5988-3774EN 有机磷 + 乙腈水 MSD ESI , ZORBAX SB-C18 871700-902 / 40 杀虫剂 DAD 2.1 mm X 50 mm, 3.5 μm 醋酸铵 5988-3649EN 地表水 离子阱 乙腈水 Sulfonylureas, Cohesive Msn Metasil Basic / 41 ESI+ 2.1 mm X 100 mm, 5 μm 醋酸、醋酸铵 5980-0561E 灭鼠剂 香肠，狗 甲醇水 MSD ZORBAX XDB-C18 993700-902 / 42 伐草克 胃内容物 ± 醋酸铵 , ESI , APCI, 2.1 mm X 150 mm, 5 μm 杀鼠醚, DAD 克鼠灵 5980-0332E 胺甲萘 复杂食品混合物 离子阱 乙腈水 MSn ZORBAX XDB-C8 990967-906 / 43 ESI+ 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 醋酸，醋酸铵 5966-0743 草甘膦 FLD 柱后衍生 IEX 44 5966-0742 三嗪类 色拉调料 推荐 乙腈 水 DAD Hypersil BDS / 苯基脲类, 3 mm X 100 mm, 3 μm XDB-C18 噻唑隆, 化学 杀草快，百草枯, 巯基苯并噻唑 5954-7852E 废型 氨基甲酸酯 旧 甲醇水 HP FLD w/ C18 / 45 柱后衍生 4.6 mm X 250 mm, 5 μm 5091-3621 草甘膦 饮用水 水 磷酸盐 LC/Pickering FLD w/ SAX-300 79919QA-754 , 46 柱前或 4.6 mm X 100 mm 柱后衍生 脂溶性维生素 5988-6361EN 第58页 视黄醇 等度 DAD ZORBAX Sil 880952-701 二氧六环 4.6 mm X 250 mm, 5 μm tBME, 正己烷 5988-6359EN 第59页 脂溶性维生素 等度 甲醇水 DAD ZORBAX XDB-C8 993967-906 / 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 5968-9408E 第60页 生素 禽饲料 二元梯度 离子阱 流动注射 无柱 甲醇水 D3 MSn – NA / APCI+ 醋酸 88 ----------------------- 页面 89----------------------- 脂溶性维生素 （续） 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5968-2970 第61页 脂溶性 四元梯度 DAD ZORBAX XDB-C18 7995118-344 MeOH/水 维生素A,D, E 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 5988-6354EN 脂溶性 VWD SB-C18 883975-902 MeOH/ACN 维生素 带波长切换 4.6 mm X 150 mm, 5 μm, XDB-C18 XDB-C18 4.6 mm X 150 mm, 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 5 μm 5988-6350EN 脂溶性维生素 VWD ODS 884950-543, MeOH/ACN A,D 和E 带波长切换 4.6 mm X 250 mm, 5 um, 883952-702 异构体K1 ODS 经典 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 5980-1390 麦角甾醇 土壤 DAD Rx-C18 866967-902 MeOH/水 维生素 前体 D 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 5966-0745 脂溶性 建议 乙腈 水 DAD, Hypersil MOS / 维生素 多种波长 2.1 mm X 100 mm, 5 μm 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm Zorbax Sil 5966-0641 生育酚异构体, 人造黄油 DAD/FLD Hypersil SI 建议 IPA/己烷 维生素E 2.1 mm X 100 mm, 5 μm 2.1 mm X 150 mm, 3.5 μm Zorbax Sil 复合维生素 5091-3194 维生素A,B,C,E 各种食品 ECD Lichrospher, Hypersil 各种条件 水溶性维生素 5988-6365EN 第62页 水溶性 梯度 DAD ZORBAX SB-C8 883975-906 MeOH/水 维生素 4.6 mm X 150 mm, 5 μm 磷酸盐 5988-5761EN 第63页 水溶性 猫粮 梯度 乙腈水醋酸 DAD ZORBAX SB-C18 866953-902 / 47 维生素 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 醋酸，磷酸 TEA 己烷 磺酸盐 5988-6364EN 水溶性 片剂 DAD SB-C18 880975-902 MeOH/水 维生素 4.6 mm X 250 mm, 5 μm, 醋酸，己烷 USP23, L1 磺酸盐 5988-6363EN 水溶性 DAD SB-C8 866953-906 MeOH/水 维生素 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 磷酸己烷 磺酸盐 5968-2971 水溶性 可制冷的 乙腈水 DAD SB-C18 866953-902 / 维生素 自动进样器 4.6 mm X 75 mm, 3.5 μm 磷酸盐 89 ----------------------- 页面 90----------------------- 水溶性维生素 （续） 主要分析物 基质 LC系统 检测 色谱柱 色谱柱部件号 流动相 注 5966-0639 水溶性 片剂 乙腈水 DAD Hypersil BDS / 维生素 4 mm X 100 mm, 3 μm H SO 2 4 混合出版物 5989-5177EN 方法转移 见应用报告 乙腈 水 1200SL DAD SB-C18 / 实例，酸性除草剂 5-, 3.5- 和1.8-μm H PO 3 4 色谱柱 5989-4934EN 类固醇，生物碱 DAD 各种Eclipse RP柱 各种条件 各种条件 5989-4721EN 遮光剂 各种 柱 各种条件 各种条件 , DAD RP 48 苯基酮, 止痛剂 5989-4086EN Luteoskyrin 各种方法 各种Eclipse RP柱 各种条件 各种条件 5989-1947EN 食品解决方案指南 各种条件 各种条件 各种条件 各种条件 49 5988-4931EN 杀虫剂, DAD 各种条件 各种条件 各种条件 50 多肽, APM 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯等 ( ) 5988-1786EN 各类化合物 DAD ZORBAX通用 各种条件 各种条件 51 5968-9346E FLD应用概况 FLD 各种条件 各种条件 各种条件 52 5968-8569pdf 多肽, DAD ZORBAX 各种柱 各种条件 各种条件 53 天门冬氨酰苯丙氨酸甲酯, NSAIDs 5 和3.5 μm 包装材料 5988-8610EN 抗氧化剂 聚合物 MSD ZORBAX XDB-C8, 935967-906 ACN,MeOH, APCI±, 4.6 mm X 50 mm, 3.5 μm THF, 水 DAD 5967-6102E 双酚 食品 乙腈水 MSD Hypersil ODS / A酯 ESI+ 2.1 mm X 200 mm, 5 μm 醋酸铵 90 ----------------------- 页面 91----------------------- 应用参考指南注释 1 加入12 pp 2 柱后加入NaOH溶液 3 溴代苯乙酰溴代衍生化试剂 4 柱前衍生w/ OPA/巯基乙醇 5 MS和MSMS，某些直接进样，某些经过色谱分离 6 各种键合相的比较 7 柱温与分离质量和选择性 8 柱前衍生 9 日文，如需要英文版，请与安捷伦Woodman联系 脱机自动 过程，正相净化 和保护柱，用异丙醇 环己烷洗脱 ， 净化 用 洗脱 ，柱后加入质量参考溶液 10 SPE (SB-CN 4.6 mm X 50 mm 5 μm / ) GPC (PLgel 50A MeCl2 ) 11 脱机柱前衍生 12 详细的样品制备过程包括脱机SPE 13 柱后掺入丙酮 14 脱机柱前衍生，详细的样品制备 15 大体积直接进样，强、弱稀释剂对峰形影响的良好对比 16 提供详细的样品制备过程 17 探讨了离子抑制的问题，使用柱后加入 18 通过离子阱MSMS和TOF 的精确质量分析，解析结构 19 食品安全基础读物_LC, GC, ICP 己基氯甲酸酯衍生化， 痕量富集 20 SPE 21 上样指南，各种溶剂 22 色谱柱通常与ICP-MS一起销售，详情请向代理商垂询 23 已投寄: Journal of Chromatography A, 789, 259-265 (1997) 改性剂，可以是芳香酸，如 苯甲酸或苯均三酸，某些应用使用氯化十六烷基吡啶作为间接或替代 阴离子 24 UV 4-OH- UV 和 分离前溴化 25 B1 G1 26 用FMOC在线衍生，非常详尽 27 在本篇综述文章中，有详尽的样品制备方法和参考文献 28 QuECHERS样品制备 29 脱机SPE痕量富集 液 液萃取和 30 / SPE 探讨了离子抑制的问题，使用柱后加入 “全自动脱机 ” 31 , SPE 32 衍生化， 痕量富集 SPE 33 新离子对试剂 34 新离子对试剂 35 柱后加入APPI 掺杂剂 “全自动脱机 ” 36 SPE 37 FMOC脱机柱前衍生，柱后加入稀甲酸 38 QuECHERS 样品植被 柱后加入含 的 39 IPA TEF 40 将DAD与MSN-SIM结果进行比较 41 Tubulent 流微量富集 详尽的样品制备， 和 ，及负离子与正离子 与 的对比 42 DAD MSD ESI APCI 43 综合而详细的样品制备. 44 Pickering 柱后衍生系统与Agilent LC/FLD 45 Pickering 系统，柱后碱水解，然后进行OPA衍生 46 Pickering 柱后衍生系统与Agilent LC/FLD 47 Titriplex-V 热提取 48 RRHT 产品介绍 49 2004年版的食品分析解决方案 50 Zorbax SB LC柱 51 Zorbax 应用指南，不同领域 52 应用书籍，不同领域 53 Zorbax高分离柱，各种应用 91 ----------------------- 页面 92----------------------- www.agilent.com/chem/cn 安捷伦对本资料中的错误，及因使用本资料所引发的相关损失不承担责任。 本资料中的信息、说明和性能指标如有更改，恕不另行通知。 安捷伦科技公司， (C) 2006 中国印刷 年 月 日 2007 5 30 5989-5674CHCN